Dr. Sahay, az MIT öregdiákja, a világ egyik vezető tudósa a vakcinák és terápiák gyógyszerformáinak területén. Gaurav Sahay az Oregoni Állami Egyetem Gyógyszerészeti Főiskola Gyógyszerészeti Tudományok Tanszékének docense. Dr. Sahay laboratóriuma új, nanotechnológián alapuló platformokat fejleszt, köztük lipidalapú nanorészecskéket a hírvivő RNS terápiás szerek hatékony szállítására a cisztás fibrózis, a retina degeneráció és a SARS-CoV2 elleni küzdelemben. Úttörő munkát végzett a nukleinsavak citoszolba történő eljuttatásához nélkülözhetetlen intracelluláris transzport feldarabolására, és módszereket dolgozott ki az endoszomális gátak leküzdésére. Több mint 48 lektorált publikációja van felső szintű folyóiratokban, köztük a Science Advances, a Nature, a Nature Communications, a Nature Biotechnology, a Nature Nanotechnology, a Journal of Controlled Release, a Nano Letters stb.

2013-ban elnyerte az American Association of Pharmaceutical Scientists (AAPS) posztdoktori ösztöndíját, a Controlled Release Society (CRS) 2015-ös T. Nagai-díját, az Amerikai Gyógyszerészeti Főiskolák Szövetségének (AACP) 2016-os New Investigator Award díját, 2019-ben Oregon-t. Az Egészségügyi és Tudományok Egyeteme (OHSU) kitüntetett kari szenátus díja az együttműködésért, 2020 Phi Kappa Phi OSU Emerging Scholar Award és 2020 CMBE Young Innovator Award. A National Institutes of Health, a Cystic Fibrosis Foundation, illetve a múltban a Moderna Therapeutics, az MRF New Investigator és az OSU által finanszírozott díjak vezető kutatója.

Dr. Sahay tanácsadóként és tudományos tanácsadó testületi tagként szolgál számos biotechnológiai és kockázati tőke cégnél. A 2018-as NanoMedicine and Drug Delivery Symposium (NanoDDS, Portland, OR) elnöke volt. Dr. Sahay posztdoktori kutatásait Prof. Robert Langernél és Prof. Daniel Andersonnál fejezte be az MIT Koch Integratív Rákkutató Intézetében, és megszerezte a Ph.D. fokozatot. a University of Nebraska Medical Centerből, Prof. Alexander Kabanov mentorálásával.

T&T Scientific, Dr. Gaurav Sahay: Lipid nanorészecskék mRNS-terápiákhoz és vakcinákhoz 

[00:00:01]

Nima Tamaddoni, PhD

Helló mindenki. Szia, Dr. Sahay! Köszönjük, hogy csatlakozott, és örülök, hogy újra találkozunk, miután, azt hiszem, három év után Oregonban voltunk, és örülök, hogy találkoztunk. Azt hiszem, 170 ember van az előcsarnokban, és további emberekre várunk. Jelenleg 20, 25 ember van a szobában. Nagyon rövid bemutatkozást szerettem volna kapni, így egy percet sem vesz igénybe, így mi, a közönség maximálisan ki tudjuk használni az Ön szakértelmét, és nagyon alázatosak, igazán alázatosak vagyunk, hogy itt vagytok. Szóval, elkezdtem a bevezetést, Dr. Sahay a világ egyik legbefolyásosabb embere a COVID-oltás terén. Az MIT-n dolgozott, mielőtt professzorként az Oregon Állami Egyetemhez csatlakozott. Csoportja már évek óta mRNS-sel, LNP-vel, lipid nanorészecskékkel dolgozott a COVID-oltások előtt. Jelentősen hozzájárult a COVID-oltások elkészítéséhez; valóban örömünkre szolgál, hogy többet tanulhatunk; nem kell több bemutatkozás, az emberek biztosan ismernek itt, és így átmentem a mikrofonon. Még egyszer köszönöm, hogy itt vagy.

 

[00:01:18]

Dr. Gaurav Sahay

Köszönöm szépen, Nima Tamaddoni, PhD. Köszönöm ezt a nagyon kedves bemutatkozást. Még mindig emlékszem, hogy három évvel ezelőtt eljöttél a Nano DDS-hez; nem igazán tettünk sokat a COVID-oltással kapcsolatban; ezek a Moderna és a Pfizer fejlesztette ki ezeket. Dolgoztunk a terepen, és nagy izgalommal tapasztaljuk, hogy ezek a technológiák, amelyeket mi és sok más és előttünk sok úttörő is dolgoztunk, megérkeztek a klinikára. Szóval nagyon alázatos vagyok a bemutatkozásod miatt, de azt is ki akartam javítani, tudod, nem igazán foglalkozunk elsősorban, hanem egy ideje dolgozunk ezen a területen, és nagyon figyelünk, és ez egy nagyon szürreális pillanat mindannyiunk számára, ahogy ezeket a technológiákat befecskendezik, és sokan… És ma úgy gondoltam, hogy ezekről a technológiákról fogok beszélni, ezek a folyékony nanorészecskék rövid ízelítőt adnak a közönségnek arról, hogy milyen különböző léteznek technológiák, majd munkánk az mRNS-alapú terápiák terén, és azt hiszem, hogy a terület merre haladna tovább a 2020-as év után, ahol ilyen figyelemre méltó fejlődést tapasztaltunk. Tehát az mRNS-alapú terápiák és vakcinák, különösen a vakcinák, a reneszánsz területéről az ipari forradalom felé haladnak. Alapvetően láttuk, hogy a Moderna milyen gyorsan elkezdte a klinikai vizsgálatát, aztán tudod. A Pfizer a BioNTech-el és az Acutas-szal is elkezdte használni a technológiát.

Arra is fejlődtek, hogy nagyon gyorsan beköltözzenek az űrbe, és minden a New York Times előtt lejátszott, és itt van néhány kivágás, és azt hiszem, történelmileg 2020 le fog esni, és mint egy áttörés év, és ez Ez egy lenyűgöző időszak sokunk számára, akik a szabályozott hatóanyag-leadású gyógyszerbejuttatás területén dolgozunk, és néhány kulcsfontosságú szempont, ahogyan Ön erről gondol, a gyógyszerészeti tudományokban, amelyek, tudod, nem az akadémiai területen foglalkoznak annyira. de az ipar nagyon alaposan megvizsgálja. De világossá teszi, mennyire fontosak ezek a szempontok. Az egyik az, hogyan kell ezeket a vakcinákat mínusz 80 fokon szállítani. Szóval, azt hiszem, két fiatal közönség odakint, a mezőny sok izgalmas dolgot csinált a lipid alapú technológiákon, de az ipari fronton is sok innováció történt, és ez kulcsfontosságú pillanat. felismerni, és ez egy nagyon érdekes időszak a terepen lenni, hogy elkezdhessünk bizonyos technológiákat használni, a TNT által lipid nanorészecskék készítésére kifejlesztett néhány technológiát, és ezért úgy gondolom, hogy ez egy kulcsfontosságú pillanat, hogy a fiatal tudósok valóban bekapcsolódjanak. és nézd meg a hatást, és ez annyira valóságos, mert a végén beadták az egyik ilyen vakcinát is, és én, tudod, megmutatta, mennyire érintett vagyok a lipid nanorészecskékben, hogy valójában LNP-kről álmodtam, egész éjszaka, felébredtem, majd visszatérő álom volt.

Szóval szerintem a valóság megfogja. De egy reneszánsz időszakból, a COVID előtti 20-ból egy ipari forradalom felé haladunk, és egy kicsit bővebben is kifejtem, ahogy haladunk. Tehát a COVID előtt arról beszéltünk, hogy milyen lehetőségek rejlenek az mRNS-alapú technológiákban. Először is, itt nem áll fenn a genomi integráció veszélye; nem kell bejutnia a magba, nagy hatékonyságú, gyors hatású, tranziens és szabályozható. Tehát a vakcinák esetében ez a kulcsfontosságú elem, mert úgy gondolom, hogy a terápia esetében hosszú ideig kell mRNS-t szállítani, és úgy gondolom, hogy a cégek dolgoznak ezen; a mi laborunk is régóta dolgozik ezen, de ez egy kicsit magas léc, mert folytatni kell az injekciót vagy más utakon át kell adni az RNS-t újra és ellene, és fenntartani ezt a szintet, de oltással Ez egy egyszeri kezelés, tudod, vagy egy kétlövéses kezelés, ahol az immunrendszer gondoskodik a többiről, és csak a kialakuló antigénre van szükséged, majd elmúlik.

Eddig pályázatként remek pályázat volt, és a COVID előtt ismét sok szó esett arról, hogy miért lépünk át ezen a területen a vakcina területére, miért fektetnek be a cégek ebbe a területbe, és én Gondolj most úgy, hogy pontosabbnak tűnik, hogy az iparban és a tudományos életben is sok erőfeszítést tettek ezeknek az eszközöknek a kifejlesztésére, mert miután a világjárvány beütött, az segített, és elég gyorsan haladt. Tehát sok mRNS-módosítást, amelyeket Drew Wiseman és Katie Crico vezetett be, azután az olyan iparágak is dolgoztak, mint a BioNTech és a Moderna, és még sokan mások. Tehát ez a módosítás kulcsfontosságú eleme lett, és ez is elvezet minket ahhoz a ponthoz, hogy módosítania kell egy mRNS-t, és szelektív szekvenciákkal kell rendelkeznie, például a COVID-oltásokhoz, amelyekben ezt a két prolin-módosítást vezették be. Tehát sok minden történt e téren. De az ezekkel a technológiákkal kapcsolatos kihívások nagyon negatív töltésűek, nem tudnak bejutni a sejtekbe, és nagyon érzékenyek a lebomlásra. Tehát a másik nem énekelt hős ebben a történetben a lipid alapú nanorészecskék, ezek az LNP-k többkomponensű struktúrák, van egy ionizálható lipidjük, ami alapvetően kölcsönhatásba lép az RNS-sel, ez a történet hőse, és vannak olyan mellékszereplők, mint pl. a szerkezeti lipid, a peg lipid, a koleszterin, amelyek elősegítik ezeknek a lipideknek a képződését, és sokat tettek a szerkezet megértése érdekében, de még mindig nem tudjuk, hogy ezek a lipidek pontosan hol találhatók a készítményekben.

A remény vagy a gondolat az, hogy a lipid pozitív töltése miatt kölcsönhatásba lép az RNS-sel, bekapszulázza az RNS-t, majd a peg lipid segíti ezeknek a lipid nanorészecskéknek a keringését, stabilitását és képződését, majd a koleszterin és a strukturális lipidek, például a DSPC segít a stabilitást, valamint endoszómális menekülést, és különféle eszközöket, például mikrofluidikus eszközöket vagy TNT-alapú eszközöket használhat ezen LNP-k tényleges megfogalmazásához. Mi tehát a fő cél? Az egyik fő cél a csomagolás és a védelem, és sok ionizálható lipidet talál, amely képes csomagolni és megvédeni a nukleinsavakat. De a kihívásról, és beszélni fogok róla, csak kevesen képesek ténylegesen ezt a vivo-t és az úgynevezett endoszomális szökést előidézni, és beszélni fogok erről, és folytatjuk. Alacsonyabb immunogenitásúak, a másik nagyon jó része ezeknek a részecskéknek a nagy kapacitásuk. Így például az adreno-asszociált vírusok nem tudnak 5 KB-nál nagyobb genetikai komponenst hordozni, és sok ilyen gén, mint a cisztás fibrózis, több mint 5 KB, néhány 10 KB-os méretű. Biológiailag lebonthatóvá tehetők. Rendelkezik újraadagolási kapacitással, tehát az AAV-k esetében csak egy lövés van, egy és kész, de ezekkel a technológiákkal szükség esetén elvégezheti az újbóli adminisztrációt, és akkor van modularitás, ami alatt azt értem, hogy sok különböző rakomány képes. hozzá kell adni vagy szerepeltetni kell ezekben az LNP-kben.

Például az első SRNS, amelyet klinikailag jóváhagytak a patron, egy LNP alapú rendszer, alapvetően ugyanazokat az LNP-ket használhatja az mRNS kapszulázására, hozzáadhat crisper cas9 ágenseket, és Itáliának a közelmúltban megjelent egy közleménye, hogy végeztek egy első fázisú klinikai vizsgálatot, ahol egy élesebb cas9 komponenst adtak, és génszerkesztést okoztak az emberi májban, és leütötték ezt a TTR nevű fehérjét, és ez olyan, mint egy kész stratégia és végül a skálázhatóság, azt hiszem, a méretezhetőség most új definíciót kapott. Úgy értem, ezek méretezhetőek voltak, de most úgy méretezik őket, hogy emberek milliárdjaiba injektálják, és ez lehetővé teszi számunkra, hogy alapvetően megoldjuk a méretezhetőségi problémát. Tehát, ha holnap kitalál egy lipid nanorészecskét, amely képes eljuttatni valamit a szemhez, az agyhoz, a tüdőhöz, akkor ebből milliárdokat termelhet, és ha ez egy ritka rendellenesség, akkor ezeket a a páciens élettartama, ezek a technológiák. Tehát azt gondolom, hogy amit ez tett, az ipari forradalmat idézett elő modularitásuk és méretezhetőségük miatt, az LNP-t különféle módokon lehet használni, és lehetséges, hogy egy csomó különböző betegséget meg lehet gyógyítani. arról, hogy milyen gyorsan haladtak a dolgok a klinikán az oltóanyaggal kapcsolatban, és hogyan lehet ezeket könnyen felhasználni más technológiákhoz, amelyek más betegségek kezelésére alkalmasak.

Szóval, azt hiszem, ez egy nagyon érdekes időszak számunkra. Tehát ebben a történetben a főszereplők az ionizálható lipidek, ezek az előző verzió, a DLN-MC3-DMA jóváhagyott siRNS szállításra, vannak lipidok alapú rendszerek, majd ott vannak a következő generációs lipidek, amelyeket az mRNS alapú technológiák szállítására fejlesztettek ki. . Tehát az első termék, amelyet 2018-ban jóváhagytak, az Onpattro volt, amely ismét MC3 ionizálható lipidet használt LNP-ben az siRNS és a TTR elleni bevitelre, és ez IV alapú beadás volt. Az mRNS-vakcinákhoz a lipidek más formái vannak, tehát ha ide néz, ezek az itt közzétett ionizálható lipidek. És tudod, természetükben nagyon hasonlóak, van különbség a peg lipidben, van egy kis különbség az ionizálható lipidekben is. A nap végén úgy gondolom, hogy a szervezet, ha egy mRNS-t ad be, amely valójában egy tüskeproteint készít, egyfajta hasonló terméket lát, különböző dóziskomponensekkel, és csekély eltérésekkel a pegben és az ionizálható lipidben, és így a másik az a szempont, hogy hogyan készülnek ezek a vakcinák, alapvetően laboratóriumi méretekben vagyunk, mindezeket a folyamatokat elvégezzük, de erről a diáról azt akarom mondani, hogy a tiszta DNS előállításától a linearizálásig, majd a termesztésig. A baktériumokba, mindnek GMP léptékű gyártásra van szüksége, és azt hiszem, önök egy csodálatos programot készítettek, és a következő foglalkozásokon e terület vezetőitől tanulhattok. De azt akarom itt mondani, hogy lehetséges, hogy ezek a dolgok 20 év múlva vagy akár öt év múlva azt mondják majd, hogy ez egy primitív módszer volt ezeknek az mRNS-eknek és ezeknek a vakcináknak az előállítására, és mert akkor be kell csomagolni őket. mint ezek a lipid komponensek, és ez egy sebességkorlátozó lépés is, amikor elkezdi összefőzni.

Szóval, úgy gondolom, hogy az oltóanyaggyártó területen is sok a tennivaló, ahol ez sokkal gyorsabb, gyorsabb út lehetne, és sok újítás fog történni ezen a téren is, és ahogy korábban mondtam, tudod , ez egy globális erőfeszítés volt, ez ismét a New York Times címlapján szerepelt arról, hogyan készíti a Pfizer ezeket a vakcinákat különböző helyeken. Tehát ismét, ha megvan a megfelelő lipid, és ha más helyre is eljuttatnád, akkor hirtelen sok más betegség kezelésére is lehetőséged nyílik. Tehát a vakcinák elkészítése után intramuszkulárisan beadják őket, bejutnak az izomsejtekbe, a limfoid régióba és az antigénprezentáló sejtekbe, ahol az antigén, jelen esetben a tüskeprotein ezzel a két pre-prolin módosítással készül. és akkor ez különböző típusú immunválaszokat aktivál, és még egyszer mondom, nem vagyok immunológiai szakértő, de ez a fajta ízelítőt ad abból, hogyan történik a szelektív immunpopulációkhoz és az izomzathoz való bejuttatás, ami tovább vezet egy olyan válaszhoz, amely egy klinikai vizsgálat elképesztő volt, ezeknek az oltóanyagoknak a hatékonysága 95 százalékos volt, ezek mindegyike lipidalapú nanorészecskékkel van csomagolva, ahogy korábban mondtam, és mRNS-t tartalmaznak ezzel a két prolin előtti módosítással.

Szóval merre menjünk tovább? Azt hiszem, nagyszerű, hogy megütjük az immunrendszert; van egy siRNS gyógyszerünk, amely intramuszkuláris szülés után a májat is elérheti. De úgy gondolom, hogy ahol az akadémia, majd potenciálisan az ipar szintjén a költözés az extra hepatikus szállítás területén van. Kicsit beszélek a tüdő és a szem térében végzett munkánkról, de sokan dolgoznak az agyban lokalizált szállítás terén, és így mindegyik szervben, ha képesek vagyunk ezeket a részecskéket a szöveteket és sejteket szelektíven megcélozni. , úgy gondolom, hogy ez sok új területet nyitna meg, és már korábban is mondtam, hogy már gondoskodtunk arról, hogy… ahogy egy területet a gyártási problémákkal foglalkoztak. Tehát úgy gondolom, hogy a következő lépések összhangban vannak, és ez átalakulhat. Tehát kezdjük azzal, hogy először megértjük, hogyan működnek ezek a lipid nanorészecskék, így ezeket a komponenseket összeszedtük, összekevertük egy eszközben, és így szép kinézetű folyékony nanorészecskéket alkottunk. Miután beadja őket IV, ezeknek az LNP-knek a lipidje leesik, és a moziban van egy ApoE nevű fehérje, amely a lipid nanorészecskék felületéhez kötődik, amelyet aztán az LDL receptor felvesz a hepatocitákban. .

Az LDL receptor ezután internalizálja, a részecske egy korai endoszómába költözik, ahol elkezd szétesni, majd a pozitív töltésű ionizálható lipid kölcsönhatásba lép ezekkel az endoszómális membránokkal, és látható a felszabadulás, és a technológia egyik kulcsproblémája hogy a menekülés viszonylag alacsony, annak ellenére, hogy ezek a dolgok a klinikán vannak, és nagyon erős anyagok. De úgy gondolom, hogy javítani tudjuk őket, és ezért jelentősen csökkentené az ezzel kapcsolatos gyártási költségeket. Ha képesek vagyunk olyan részecskéket előállítani, amelyeknek jobb a szökési hatékonysága, akkor az mRNS alapú szökés szerintem körülbelül 15 százalék, és amit akkor találtunk, amikor posztdoktori voltam az MIT-n, hogy ezeket a részecskéket is újrahasznosítják, és van egy koleszterin transzporter, ún. Neman sertés C típusú, amely egyes részecskéket a sejteken kívül visszafolyatja. Tehát 2015-től 2019-ig volt lehetőségünk a Modernával dolgozni, és ott alapvetően különböző koleszterin származékokat használtunk, tehát mivel ezeknek a lipid nanorészecskéknek van koleszterin komponensük, és ezt mondtam korábban. van egy koleszterin transzporter, amely újrahasznosítja ezeket a részecskéket, feltételezzük, hogy lehetséges, hogy a koleszterin használatával, tehát a koleszterin származékaival való helyettesítése az mRNS alapú géntranszfekció javulását eredményezné. Tehát ezeket a koleszterin származékokat a koleszterin szerkezete alapján csoportosítjuk.

Így némelyiküknek nem volt ugyanaz a testfelépítése, más a farka és különböző fejcsoportok, majd leváltották a koleszterint, és ezekkel a származékokkal LNP-ket kezdtek készíteni. Amit itt találtunk, és ami szintén nagyon érdekes, az az, hogy a koleszterin C24 alkilszármazéka, amely a béta citoszterol, és a csoportok olyan részecskéket alkottak, amelyek nagyon hasonlítanak a tipikus LNP-hez; hasonló kapszulázási hatékonysággal és mérettel rendelkeztek. De ha megnézzük a transzfekciós hatékonyságot, akkor a fűtőcellákban 204-gyel jobb volt, és sejttípustól függően 222 vagy 200-szoros különbség lehet, ami nagyon érdekes volt számunkra, mert tudod, a szakterület az ionizálható lipidekre összpontosított. Érdekes volt felfedezni, hogy a koleszterin szintén kulcsfontosságú szerepet játszik abban, hogy hogyan javítja a sejteken belüli bejutást. Tehát két lipidet teszteltünk, az egyik a DLN-MC3-DMA, majd a lipid-9 a Moderna ajándéka volt nekünk, és megnéztük a kapszulázási hatékonyságot, nagyon hasonlóak voltak, a méretük kicsit nagyobb volt és azt találtuk, hogy a citoszterint tartalmazó LNP-kben, és amit ELNP-nek neveznék, vagy LNP-nek nevezném, ezek a poliéder alakok láthatók, tehát ez a tipikus LNP, a benne lévő különböző ionizálható lipidek és az összes többi komponens. Az egyetlen különbség az, hogy a koleszterint citoszterollal helyettesítették, és amit itt lát, az ezek a poliéder alakú struktúrák. Ha megnézzük a koleszterin belső szerkezetét, az nagyjából ugyanaz, de csak a külső szerkezete volt más, és azt is megállapítottuk, hogy ha ezeket a 24 szénatomos alkilszármazékok analógjait használja, akkor ismét különbségeket fog látni, és ezeknek a szerkezeteknek az alakja leggyakrabban poliéder alakú volt.

Tehát újra megnézheti ugyanazokat a morfológiai változásokat, amelyek történnek, és úgy gondoljuk, hogy ezek a szerkezeti eltérések miatt ez különbségekhez vezet ezeknek a részecskéknek a kereskedelmében. Szóval, ez egy újabb videó, amely többfelbontású 3D-s képalkotást mutat be, és egy munkatársunkkal készítettük el ezt a fajta nagyfelbontású képalkotást, ahol meg lehet jeleníteni ezeket a lipid nanorészecskéket, amint 3D-ben belépnek a sejtekbe, és LNP-kkel látja, hogy azok alapvetően átütköznek az endoszomális membránon és felvázolják azt, és hiányzik belőlük az a menekülési faktor, de ezekkel az ELNP-kkel vagy a fokozott LNP-kkel látja ezt a nagyon lineáris mozgást a sejten belül, amiről azt gondoljuk, hogy valószínűleg a jobb szökésnek vagy a jobb diffúziónak köszönhető. a sejtek belsejében. Továbbá, amit ezután tettünk, azt akartuk tudni, hogy ez valóban egy menekülési paraméter-e. Tehát létrehoztunk egy galectin-8 alapú sejtvonalat, így az endoszómális meneküléshez bizonyos citoszolikus fehérjék vannak, ha egy endoszómafajta megsérül, a galaktin8 a felszínéhez kötődik, és amit látni fogunk, azok ezek a pontszerű struktúrák, amelyek jelzi a megtörtént menekülést. Tehát amit itt lát, az a zöld sejtekben van, amelyeket stabilan transzfektáltak galectin8GFP-vel. Itt csak ennek a fehérjének a sejtmagját és citoszol jellegét látod. Miután hozzáadta a koleszterint, az LNP-t, amely ismét jelöletlen. Elkezdi látni ezeket a kis pont- vagy pontszerkezeteket.

Mindezek az események ritka események, amelyek ezeknek a részecskéknek a szökését mutatják. Ahogy korábban is mondtam, a szökés viszonylag alacsony, és mi, tudod, még mindig ki akarunk találni egy módszert, amely ezt bizonyíthatja. De ha egyszer hozzáadja a citoszterinben található ELNP-t, látni fogja a galektinát masszív megjelenését, amely itt citoszolos volt. Most kezdesz látni, hogy sok endoszómális hólyag képződik, ami azt jelzi, hogy nagyon magas szökést látsz, ami a sejten belül történik. Tehát, ha számszerűsítjük, ez alapvetően a koleszterin kiszabadulása, és a citoszterol esetében elkezdjük látni ezt a nagyon magas szökést, ami úgy történik, ahogy ezt az összekapcsoló segédanyag-toborzási vizsgálat jelzi. Tehát lipid nanorészecskéket képezünk koleszterin származékkal, béta citoszterollal vagy analógjaival, ami jobb diffúziót eredményez a sejten belül. Valahogy a részecskék szétesnek, és jobb módon a hagyományos LNP-vel és az ionizálható lipiddel, amelyek sokkal hatékonyabban lépnek kölcsönhatásba az endoszómális membránnal, ami jobb kijutást eredményez, és ez egyfajta sérült endoszómához vezet, ahol a galaktinát kötődik, és láthatóvá válik. azt. Tehát ez még egy tippet adott nekünk, hogyan javíthatja az endoszomális menekülést. Tehát, amikor a COVID-járvány kitört, azt gondoltuk, mi is hozzájárulunk a magunk módján ezen a területen, és tudod, az ipar már dolgozott a vakcina frontján. Tehát arra gondoltunk, miért ne dolgoznánk a megelőzési stratégián, vagy alapvetően egy vírusellenes stratégián, amely egy terápiás és mRNS-alapú technológiát használ. Tehát ebben az esetben azt tettük, hogy a SARS-CoV-2 az ACE2 receptoron keresztül jut be a tüdőbe, amely szintén egy enzim, és létezik az ACE-2-nek egy oldható formája is, amely nagyon csekély mértékben expresszálódik a szervezetben. Úgy gondoltuk, ha az ACE2 oldható formáját mRNS-ként szerkesztjük, és intravénás injekció vagy inhaláció után bejuttatjuk, ez az ACE2 oldható formájának szekréciójához vezet, amely csaliként működik, és megakadályozza a fertőzés előfordulását.

Tehát megalkottuk az ACE2 oldható formáját, ahol elkészítettünk egy olyan variánst, amely nem tartalmazta az ACE2 transz membrán doménjét, és volt egy V5 címkénk, hogy a sejtek transzfektálása után számszerűsítsük. Tehát a Calu-3 tüdősejtekben az ELNP készítményünkkel azt találjuk, hogy a táptalajban hatalmas mennyiségű oldóanyag is kevesebb. Ha transzfektálja a sejteket és Western blot analízist végez, ismét sok fehérjetermelést lát. Tehát a fehérjében oldódó ACE2-t a sejt alakítja ki, majd a tápközegben kiválasztódik. Miután ezeket a részecskéket a tüdőbe csepegtette, mivel a tüdő az elsődleges hely, ahol a vírus alapvetően hat a riporter vizsgálattal, láthatja, hogy az orrba történő behelyezés után elsősorban a tüdőben és a tüdő hörgő alveoláris mosófolyadékában jelentkezik. 2-24 órán belül kezdi látni az ACE48 szekrécióját, és IV injekciót is adtunk, és már két órán belül látni lehetett az ACE2 szekrécióját a szérumban. Tehát, amit ezután tettünk, az az volt, hogy létrehoztunk egy SARS-CoV-2 pszeudovírust, amelyen volt a tüskeprotein és a luciferáz gén, ez kölcsönhatásba lép az ACE2 receptorral, és akkor látod a luciferáz aktivitást.

Tehát, amit itt láthat, az az, hogy amikor túlzottan expresszálja az ACE2-t, elkezdi látni, hogy a tüskeprotein elkezdi megkötni és transzdukálni a sejteket. Ha nincs ACE2, akkor egyáltalán nem működik. A VSV, amely egy ACE2-től független glikoprotein, képes megfertőzni a sejteket, függetlenül attól, hogy az ACE2 elérhető-e bennük. Szóval, ha már működik ez az ACE, mert ezt tavaly júliusban adtuk ki, akkor beletelt egy kis időbe, amíg rájöttünk, hogyan kell ezt a működést megvalósítani, de ha egyszer kezeli az oldható lipid nanorészecskéket. ACE2 formája, ez az ACE2 túlzottan expresszáló sejtekben a tüskés pszeudovírus fertőzés. Miután hozzáadta az oldható ACE2-t, 90 százalékos transzdukció-gátlást tapasztal ezzel a pszeudovírussal. A VSV-nek van egy kontrollja attól függetlenül, hogy volt-e oldható ACE2 vagy sem, még mindig képes transzdukálni a sejtet. Tehát jelenleg néhány munkatársunkkal azon dolgozunk, hogy ezeket a vizsgálatokat élő állatmodelleken végezzük, és remélhetőleg legközelebb erről is lesz adatom. A másik dolog, a COVID előtt, amivel korábban foglalkoztunk, és ami alapvetően segített abban, hogy elég gyorsan eljussunk a tüdőszülés területére, a cisztás fibrózis volt. A CF tüdőbetegség; hiányzik a CFTR, amely kloridot szekretáló ioncsatorna. Tehát, ha hiányzik a klorid, a nyálka megvastagodik, és másodlagos fertőzések lépnek fel, amelyek halálos kimenetelűek. A Vertex kitalált néhány kis molekulát, amelyek valóban transzformatívak voltak a CF-ben szenvedő betegek számára, de sok a mutáció a CFTR között, és így, ha ki tudunk találni egy stratégiát, amely visszaadja a CFTR gént, lehetséges, hogy független a beteg genotípusának megfelelően, meg tudja majd oldani ezt a problémát. Tehát ebben a tekintetben ismét megalkottunk egy CFTR-mRNS-t, elkészítettük a lipid nanorészecskéket, majd transzfektáltuk a sejteket, és a CF-es betegek tesztelése még a klinikán is az orrpotenciál különbséget okoz, mivel a légúti hám nagyon hasonlít a tüdőhám. Látni fogja, hogy a kloridcsatorna nem működik. Tehát a nazális potenciálkülönbség felhasználásával ismét számszerűsítettük az LNP-k CFDR-mRNS-sel történő szállításának képességét, és azt találtuk, hogy ha egyszer beadja a CFTR-mRNS-t, a klorid-szekréció visszatér, és körülbelül 14-ig ott marad. napok.

Jelenleg tehát porlasztott részecskéket készítünk, hogy ismét beadhassuk a tüdőbe a CFTR-mRNS-t. A másik dolog, amit szintén megtettünk, hogy azt mondtuk, használhatunk-e másik célpontot a CF-ben. Tehát egy másik célpont a CF-ben egy nátriumcsatorna, ennek a nátriumcsatornának a túlzott expressziója a nátrium több beáramlását okozza, és vannak olyan tanulmányok, amelyek azt sugallják, hogy ha nincs CFTR, akkor a nátrium enact csatorna hiperaktív. Ahová a nátrium megy, a víz megy, és ezért a nyálka nagyon sűrűvé válik. Tehát a vállalatok megpróbáltak siRNS-t készíteni a nátriumcsatorna ellen, ezért az siRNS-stratégia helyett inkább arra gondoltunk, hogy miért ne készítenénk egy mRNS-alapú stratégiát, ahol az ENaC egyik alegységének mutánsát, az alfa ENaC-t készíthetnénk el. az alegység a kulcselem, tehát az alfa, béta, gamma időzítőjében mindig szükség van az alfára, az alfa és a béta működhet, az alfa és a gamma pedig működhet, és a másik nagyszerű dolog ezzel a technológiával, hogy ez egyfajta cella szelektív, mert a csatorna csak ott működne, ahol a többi alegység is kifejeződik.

Ha megadja az alfa-alegység-tónusú olyan sejttípusokat, amelyekben nincs más alegység, akkor az egyáltalán nem működne. Tehát, miután elkészítettük ezeket a mutánsokat, transzfektáltuk a sejteket, és azt találtuk, hogy a nátriumáram a transzfekció után alapvetően csökken a kezeletlen változathoz képest. Tehát ez a kezeletlen változat, ha egyszer elkezdi kezelni az alfa-mutánssal, a nátriumcsatorna kevésbé lesz… kevésbé áramlik be a nátrium a sejtekben. Tehát a jelenlegi stratégiánk az, hogy ha meg tudjuk adni a CFTR-mRNS-t az ENaC mutánssal, akkor kombináljuk, ez jobb stratégia lehet a CF tüdő ellen. Tehát jelenleg az az elképzelés, hogy porlasztjuk a részecskéket, és egyfajta dózistitrálást végzünk, ahol különböző dózisokat végzünk, de különböző időpontokra is adagoljuk, és fenntartjuk ezeknek a célfehérjéknek a funkcióját. Ahogy a terápiánál is mondtam, ez sokkal nehezebb, mert többször kell újra adagolni az állatot, és a porlasztásnál az a baj, hogy a részecskék alapvetően nagyon puha anyagok, így széttörhetnek. Ebben az esetben szüksége van egy stabil részecskére, amely szét tud bomlani a sejtekben, és a közelmúltban egy végzős diákom készített egy bizonyos készítményt, amely képes elviselni a tipikus LNP-nket. És tudod, némi összetételmódosítással porlaszthatjuk ezeket a részecskéket, és elég jól átfertőzik az egeret. Jelenleg tehát azon dolgozunk, hogy a CFTR mRNS-t vagy akár az ACE2 stratégiát használjuk, és egy LNP-hez hasonló összetételű porlasztott részecskét szállítsunk, és ahogy korábban mondtam, ha elkezdjük a dolgokat eljuttatni a tüdőbe, a szívbe, a másikba. szerveket, ez transzformatív, mert annyi más géncélpont van, amelyek után utánajárhatsz, ezek egy részének génszerkesztését is elvégezheted.

Például a CFTR-re, mert moduláris jellegűek, így ha egyszer sikeres leszel itt, az egy csomó más betegség előtt is megnyitja az ajtót, és más típusú rakományok előtt is. Végül, az utolsó hely, ahová úgy gondolom, hogy beköltözünk, és úgy gondolom, hogy extra májszülés esetén, az a lokális, szemre történő szállítás. A szem, tudod, a szem látásélessége a retinának köszönhető, amely nincs jelen a szem hátsó részében, tehát a fény alapvetően a retinába jut és oda megy, tehát ha ide nézel, akkor alapvetően megy. erről az oldalról itt a ganglionsejt rétegtől a fotoreceptorok felé és a fotoreceptorok ott vannak, ahol a fény elektromos jellé alakul át, amely azután visszamegy, és továbbítja az agyba. Ha a fotoreceptorok degenerálódnak, az vakságot okoz. Tehát sok öröklött retina degenerációt az okoz, hogy a fotoreceptorok degenerálódnak, és lassan, tudod, láthatod, hogy egy gyermek felnőtté válik, és megvakulhat. A másik sejttípus, amely kritikus az öröklött retina degenerációban, az RPE; Az RPE egy pigmentált hámsejt, tehát itt ezek mind idegsejtek. Az RPE a hámsejt, amely segít a fotoreceptor külső szegmensének megtisztításában, így minden reggel, amikor felébredünk, ezek a külső szegmensek alapvetően le lesznek vágva, visszaregenerálódnak, és ezeknek a fotoreceptoroknak a kivágott külső szegmensei elnyelődnek és lebomlanak. Tehát, ha az RPE megromlik, a külső szegmensek elkezdenek lerakódni az RPE-re, és ez szintén degenerációt okoz.

Tehát az RPE és a fotoreceptorok mutációi általában öröklött retina degenerációhoz és pigmentos retinitishez vezetnek. Az egyik jóváhagyott terápia az AAV-terápia, amely visszaadja az RPE-65 nevű gént, és ez egy egyszeri kezelés, de sok gén van, amelyek mérete nagyobb, és ha bármit akarsz csinálni, az jobb, ha ezen genomi komponensek egy részét, például a cas9-et nukleázként szállítjuk, ahelyett, hogy stabilan transzfektálnánk a sejtet. Ezért arra gondoltunk, hogy kifejleszthetünk-e olyan LNP-ket, amelyek képesek eljutni a szem hátsó részébe, különösen a fotoreceptorokhoz és az RPE-hez. A kihívás a szállítás. Tehát az útvonal, amelyen keresztül valóban átfertőzheti a szem hátsó részét, egy retina alatti hólyag. Tehát azt csinálod, hogy veszel egy tűt, és odamész a retina hátsó részéhez, az al-RPE mögött, és itt, ezen a területen, és ide fecskendezed be a részecskéidet. Tehát a jó hír az, hogy sokkal közelebb van a sejttípus közelségéhez. A kihívás az, hogy egészen felfelé kell menni, ehhez olyan, mint nagyon jól átvilágított, képzett klinikusok kellenek, és ez egy egyszeri injekció, nem lehet újrainjekciózni. A szem hátsó részébe történő bejuttatás másik módja lehet az intravitrealis injekció, például a VEGF, amelyet havonta adnak intravitrealis injekcióként, nagyobb a beteg együttműködése, nincs károsodás a retinában, de az üvegtest nagyon viszkózus és kevés a szövet. penetráció ennek köszönhetően. Tehát a nem vírusos és vírusos vektorok esetében az intravetriális kilökődés utáni bejuttatás óriási probléma, ezért lipid nanorészecskét készítünk, és ez alapvetően megmutatja a problémát. Tehát csinálhat egy hátsó injekciót, használhat LNP-t, látja az RPE transzfekcióját, tehát nem a fotoreceptorok, az LNP-k tipikus LNP-k, csak fecskendezze be a szem hátsó részébe azokat a hámsejteket, amelyeket ismét, ha sikerül kezelni. … betegségei közül, amelyek az RPE mutációiból származnak, transzformatív is lehet.

Amint láttuk a luxtarna esetében, amely egy AAV alapú módszer. De ha intravitrealis injekciót ad be, akkor azt fogja tapasztalni, hogy az intravetrialis injekció után a transzfekció csak a periférián történik. Tehát van egy kis membrán, az úgynevezett belső határoló membrán, amely megakadályozza, hogy bármi elhaladjon és elérje a szem hátsó részét. Tehát itt vannak a minket érdeklő sejttípusok, ez az üvegtesti kamra, ahová beadja az injekciót, és a többi, a nanorészecskék alapvetően ebben a régióban ragadnak meg. Tehát olyan módszereket szeretnénk kidolgozni, amelyek rávezethetik az LNP-ket arra, hogy átlépjék ezeket a korlátokat, elérjék a szem hátsó részét, és gyógyszereket szállítsanak. Tehát korábban azt csináltuk, hogy különböző kationos lipideket készítettünk, szűrtünk, és azt találtuk, hogy ezek közül az MC3 érte el a legjobban az RPE-t, nagyon kevés vagy semmi a fotoreceptorokban, majd más komponenseket is átvizsgáltunk. Tehát módosítottuk a koleszterint, a peg, tudod, stabilitást okoz, valamint a hype-szabályozás jobb behatolást eredményezhet az üvegtestbe. Szóval ezt is ki akartuk próbálni. Az általunk használt Ai9 egereket használjuk, amelyekhez 3D paradicsommal ellátott log speed stop oldal tartozik. Tehát, ha három mRNS-t adsz meg, az szerkesztést okoz, és ennek köszönhetően bármit megjeleníthetsz 3D-s paradicsomban.

Tehát, ha egyszer beadta ezt a szemébe, a retina alatti injekció után szemfenéki képalkotással kezdtünk látni, tehát ez egy élő állatnál van, egyszerűen fogjon egy műszert, és nézzen a szem hátsó részébe, és a piros jel azt sugallja, hogy azért történt szerkesztés, mert lipid nanorészecskéket adott három mRNS-sel. Egy intravitreális injekció után, ahogy itt látható, a transzfekció viszonylag alacsony, és miután levágta a metszeteket, rájön, hogy a transzfekció nagy része az RPE-ben van, és ez alapvetően itt van, a belső határoló membránban, és semmi sem ér el igazán a hátul. a szem. Tehát azt is megvizsgáltuk, hogy melyek azok a mechanizmusok, amelyeken keresztül történik a szállítás. Ebben az esetben egy mCherry-vel ellátott LNP-t adunk hozzá. Ismét azt látja, hogy egy RPE transzdukálódik vagy transzfektálódik. ApoE knockout egereknél, ha ApoE knockout egereket vesz be, és LNP IV-et ad be, akkor nem látja a májeladást, de a szem esetében nagyon jó szülést lát hátul. Tehát ez azt jelenti, hogy az ApoE nem az elsődleges endogén ligandum, amely segíti a részecskéket az RPE-be jutni. Volt egy másik fagocita receptorunk, a MertK, és ennek köszönhetően még mindig nagyon jó transzdukciót látunk. Tehát, amit most megtettünk, az az, hogy valójában különböző technológiákat használunk, hogy ezeket az LNP-ket a fotoreceptorokhoz érjük, és itt némi sikert értünk el. De sikerült némi sikert elérni a részecskék elkészítésében és megtervezésében, hogy áthaladjanak és elérjék a szem hátsó részét, és remélhetőleg néhány hónapon belül meg tudom majd beszélni ezeket, amint közzétesszük őket.

Tehát, amikor legközelebb itt leszek, arról beszélhetek, hogyan fejlesztettük ki ezeket a technológiákat, amelyeken keresztül ténylegesen át tudnak hatolni a különböző sejttípusokon, különösen a fotoreceptorokon és az RPE-n, és úgy gondolom, hogy ez sok ajtót nyit meg nem csak a gén számára. de azt hiszem, izgatott vagyok az RPE vagy a fotoreceptorok sok különböző mutációjának genetikai, génalapú szerkesztése miatt, mert az olyan lenne, mint egy egyszeri kezelés. Tehát ez néhány olyan kép a nem publikált adatainkból, ahol kitaláltunk módszereket ezeknek a lipid nanorészecskéknek a megtervezésére, amelyeket intravénásan injektálhat, és elkezdenek transzdukálni egy másik sejtpopulációt, különösen a szem fotoreceptorait, és úgy gondolom, hogy nagyon izgalmas számunkra. Szóval végül azt gondolom, hogy ahol a mező mozog, az az extra májszülés, volt bizonyíték, és amikor én voltam, tudod, posztdoktor a Langer Anderson laborban, valójában befecskendeztünk néhány részecskét az agyba, és elkezdtél lásd a kifejezést négy óra alatt.

Itt is az a helyzet, hogy ez csak egy ideig korlátozva lenne; intramuszkuláris szülés most lehetséges, májba szállítás lehetséges. De azt hiszem, lassan a lokalizált szállítás fázisába lépünk. Mutattam néhány példát a szem alapú bejuttatásra, a porlasztáson alapuló tüdőbejuttatásra, de vannak olyan intravénás megközelítések is, amelyek elősegítik az extra májszülést. Például Dan Siegert egy olyan technológiával publikálta a munkáját, amely eltalálja a tüdőt, és felhasználhatja génszerkesztésre vagy génszállításra. Bizonyítékok vannak arra, hogy olyan polimereket használnak intraperitoneális injekcióhoz, amelyek eltalálhatják a makrofágokat. Szerintem a terület a sejttípus-specifikus területre is átköltözne, és ez nem olyan dolog, amit mostanában fedeztek fel, néha beszélgetek emberekkel, és nem arról van szó, hogy a terület nem működött ezen a területen. De úgy gondolom, hogy most, az új technológiák megjelenésével és a járvány hatásaival, akkora az érdeklődés, hogy képesek leszünk megoldani ezeket a hosszú távú kihívásokat, amelyekkel a területen szembesültünk.

A DNS vonalkód-technológia, úgy gondolom, ez egy másik nagyszerű módja a lipid nanorészecskék szűrésének, és elősegítheti a szállítást, például annak megállapítását, hogy egy lipid nanorészecske különböző sejttípusokat érint-e a szervekben, más nagy áteresztőképességű stratégiák ezek előállítására. az anyagok továbbra is útban lesznek, az új anyagok és a kémia fontos. De szerintem ez egy ciklikus dolog lenne, ahol olyan dolgokat csinálunk, amelyek részecskék előállításán alapulnak, majd csak teszteljük őket, de aztán megpróbáljuk alapvetően megérteni őket. Mint az ApoE esetében, olyan alapú, mint az LNP szállítás, amely segíthet nekünk egyre jobb anyagok tervezésében, majd visszatérni a ciklusba, és mintegy továbbfejleszteni ezeket az anyagokat a következő generációjukhoz, és azt hiszem, itt tartunk, ahol ez valószínű. Tudod, öt vagy tíz éven belül, vagy még gyorsabban, a terepen jelentkező érdeklődés miatt képesek leszünk újabb anyagokat kidolgozni, amelyek a következő generációs anyagok, amelyek különböző célpontokat érhetnek el, és ha ez megtörténik, akkor szállíthatnánk különböző rakományok ezeknek az anyagoknak a modularitása miatt, és ha már különböző rakományokat tud szállítani, akkor tudja, elnémíthat egy gént, képes csomagolást adni, szerkeszthet egy gént, és szerintem ez átalakító lenne a területen, és ez miért ez ipari forradalom. Végezetül szeretném megköszönni jelenlegi labortagjaimnak és korábbi tagjaimnak, munkatársaimnak, valamint a CF alapítványnak és az NIH-nak a finanszírozást, és ezúton is tudom fogadni minden kérdését, és még egyszer nagyon köszönöm ezt a nagyon kedves meghívást, öröm volt. 

[00:45:53]

Nima Tamaddoni, PhD

Természetesen! Nagyon köszönöm, Dr. Sahay. Nagyon informatív volt, az biztos, és köszönjük a rendkívül élvonalbeli információkat, amelyeket a közönségnek nyújtottatok, most több kérdésünk is van. Graham fel fogja olvasni neked, és te válaszolhatsz rá a közönségnek. Szóval, Graham, természetesen kérdezhetsz.

[00:46:22]

Graham Taylor, PhD

Biztos! Szóval, igen, Dr. Sahay, nagyon köszönöm. Volt néhány kérdésünk, például Stephanie Khan-tól, aki néhány szaxofon adatról kérdezett, amelyeket megosztottak az LP belső szerkezetével kapcsolatban, és arról, hogyan tekinthetnénk át, hogyan azonosíthatjuk az LNP különböző összetevőit szaxofon segítségével. elemzés?

[00:46:44]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, úgy gondolom, ez egy nagyszerű kérdés, és ez ismét a Modernával együttműködve történt annak idején, és azt hiszem, nagyon hasonló szakemberek voltak, akik ezt megtették. De az én szemszögemből azt teheted, hogy csak a belső szerkezetet nézed meg, és van egy papír az extrazynic-től is, ahol ezek a részecskék belső szerkezetét nézik, és kezdetben azt gondoltuk, hogy lehet változás. a belső szerkezetben. Amit találtunk, az nem volt különbség. Ismét vannak korábbi módszerek, ahol alapvetően UHPLC-t és hasonlókat lehetett használni, csak hogy megnézzük a lipidek különböző összetevőit. Tehát 2013-ban megjelentek olyan cikkek, hogy hogyan lehet megnézni, ha elkészítette a részecskét, hogyan lehet jellemezni, tudja, mennyi lipidtartalom van benne. De visszatérve a SAKS kérdéséhez, úgy gondolom, hogy ez egy belső struktúrát tár fel, és úgy gondolom, hogy ott többet kell tenni. Amit nem találtunk, az nem volt különbség, és ehhez eltartott egy kis idő, mert ott voltak a zaj és hasonló problémák is.

Szóval, úgy gondolom, hogy a com egyesíti a Saks-t olyan dolgokkal, mint például, hogy nekünk, mivel van egy NIH-alapú EM-központunk, csak a pincénkben hat különböző vágyakozással, sokkal könnyebb volt megnézni, és hogy hol kezdtük el kitalálni. ki, tudod, hogy van egy külső szerkezet, ami változik, ebbe az irányba indultunk el. De úgy gondolom, hogy ezeknek a különböző technológiáknak a kombinálása hasznos lehet ahhoz, hogy felfedjük, hol és hogyan ezek a Saks megmutatja nekünk, tudod, nem azt, hogy pontosan hol vannak a lipidek, hanem legalább azt, hogy mi a lipid belső szervezete. Csak ezt nem tudjuk, igaz? Mint tudjuk az EM-eknél, tudod, a morfológia más, de hogy ezek a dolgok milyenek, tudod, egy fordított hatszögletű morfológiában van-e benne, hogy milyen alakzatokat vesznek fel a sejtben, ami a kritikus elem, amit Saks adhat és ez segíthet, mert tudod, a kézbesítés szempontjából, hogy ezek a dolgok hogyan jelennek meg, és milyen formában, ez fontos lehet számunkra.

[00:49:05]

Nima Tamaddoni, PhD

Fantasztikus!

[00:49:06]

Graham Taylor, PhD

Nos, nagyon köszönöm Dr. Sahaynek, és köszönöm Stephanie-nak a kérdést. Igen, szóval egy másik kérdés, ez talán egyértelműbb lesz a Muhammad iszlámtól, mondja nagyszerű munka, Dr. Sahay. Ha nem intravénásan vagy intravénásan juttatjuk be az LNP-t, az ApoE fehérje részt vesz a sejtfelvételben? 

[00:49:33]

Dr. Gaurav Sahay

Ez egy nagyszerű kérdés. Tehát, tudod, a szemben nem találjuk ezt, tehát amikor ApoE-kiütést használtunk, tudod, modellt a szemben, azt tapasztaltuk, hogy a részecskék az RPE-ben is csak most jutnak el. Tehát egyszerűen nem tudjuk, hogy mi kötődik egy LNP felületéhez a szemben, ugyanaz az LNP, amelyhez ApoE szükséges az IB beadás után. Nem tudom, hogy az izom, igaz? Tehát nem láttam ott adatokat, de amennyire tudom, különösen a szem számára, tudod, az ApoE-re nem volt szükség. Tehát lehetnek más fehérjék is, amelyek segítik a kötődést és a transzdukciót vagy transzfekciót ezekkel a részecskékkel.

[00:50:25]

Graham Taylor, PhD

Oké. Lássuk, egy kérdés, egy további kérdés az volt, hogy tudna-e egy kicsit bővebben elmagyarázni az általa magyarázott endoszomális menekülési ACE-t? Talán ez volt a gáz, a fehérje, a sérült endoszómák miatt.

[00:50:44]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, úgy gondolom, hogy a galactin8 egy citoszolikus fehérje, és akkor fedezték fel, amikor az emberek valójában mikobaktériumokat néztek. Tehát 2012-ben vagy valami ilyesmiben, tudod, az emberek megnézték, tudod, mi történik, ha a mikobaktérium megfertőzi a sejteket, és ez a citoszolos fehérje lényegében megállapították, hogy kötődik a sérült hólyaghoz, és egy autofagoszómába viszi elpusztításra. 2013-ban Anders Vitro először mutatta meg, hogy ha LNP-t használunk siRNS-sel, akkor ezek a galaktinok egyfajta kötődnek az endoszóma felszínéhez, majd, tudod, most és hasonlók, megmutattuk mRNS, de vannak papírok más galektinekkel is, és vannak, akik polimerekkel is kimutatták. Tehát a történet az, hogy ez egy citoszolikus fehérje, amely egy sérült endoszómához kötődik, amelyet aztán elnyel egy autofagoszóma, hogy megsemmisüljön. Tehát ez alapvetően szenzorként működik, tehát veszel egy LNP-t, vannak sejtjeid, amelyek stabilan transzfektáltak galektinnel, citoszol jellegűek, csak hozzáadod ezeket a részecskéket, és látni fogod, hogy ezek a funkcióstruktúrák megtörténnek. Az ELNP-k esetében azt találtuk, hogy tízszeres javulást jelent a galaktin8-vásárlás egy endoszómához való viszonyában, ami azt mutatja, hogy több enyhe károsodás történik, és ez jobban segíti a szökést, ami jobb transzfekcióhoz vezet. amit az ELNP-knél látunk.

[00:52:38]

Graham Taylor, PhD

Igen, fantasztikus! Igazán innovatív ACE, hihetetlen videó volt látni, hogy ez élőben történik a sejtekben, és úgy tűnik, ez valóban összefügg a transzfekcióval. Lássuk csak. Szóval, ez talán egyszerű, valaki megkérdezte, hogy van-e meghatározott méret, célméret a részecskék számára, ideális részecskeméret az LNP-knek vakcina vagy génbejuttatáshoz.

[00:53:08]

Dr. Gaurav Sahay

Szóval, ez egy nagyszerű kérdés, és azt hiszem, van egy nemrégiben megjelent Moderna cikk, azt hiszem, a megfelelő szerző, ahol ismét ez van. a membrán nagyon kicsi, de az immunpopulációra intramuszkuláris injekció után olyan főemlős adatokkal rendelkeznek, hogy ott nem igazán számítanak abban az esetben, amikor a nagyobb részecskék nagyon hasonló immunválaszt tudtak adni, mint egy kisebb részecske is. . Szóval, ez valóban attól függ, hogy hová ad be injekciót, mert úgy gondolom, hogy az IV injekció beadása után a dolgok kereszteződnek, a fenestrát körülbelül 200 nanométeres méretű, tehát jobb, 200 nanométer alatti részecske kell ahhoz, hogy a májba kerüljön. Az izom, úgy tűnik, nem igazán számít. Nem tudom, tudod, hogy számít-e a töltés vagy sem, és a szemben mindenképpen kisebb részecskékre van szükséged, ha át kell lépned bizonyos korlátokat. Tehát ez a sejttípustól függ, és tudod, az immunsejtek nagy dolgokat tudnak felzabálni, és a szervet és az akadályokat, amelyeken át kell lépnie, mielőtt elkezdené ezeket a részecskéket is megtervezni.

[00:54:30]

Graham Taylor, PhD

Szóval igen, bizonyos értelemben attól függ.

[00:54:34]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, attól függ. Úgy értem, lehet, hogy nem biztos, hogy számít, szóval ha az immunrendszeren dolgozik, akkor lehet, hogy nem, de lehet, hogy számít, ha más szerveknek ad.

[00:54:49]

Graham Taylor, PhD

Biztos! Lássuk, nagyon sok nagyon jó kérdés érkezik. Valaki megkérdezte, hogy mi határozza meg egy belső részecske szöveti specifitását, vagy megtervezhető-e úgy, hogy kifejezetten az agy számára szóljon? Szóval, igen, esetleg bármilyen megjegyzés, hogy mi határozza meg a konkrétságot, vagy mit tudunk ott 

[00:55:09]

Dr. Gaurav Sahay

Először is úgy gondolom, hogy az LNP-k sikeresek voltak a csataoldalon, mert korábban véget értek, azt hiszem, hallgatok néhányat… szóval, tudod, alapvetően felveszik az ApoE-t a szérumban, és ez is időbe telt, szóval az emberek azt hiszik, oh ha nanorészecskéket szállítasz, azok a májba mennek, igen, de a kuffersejtek, az al-ilamnak, az MIT-nek és az UBC-nek 10 évbe telt. a máj hepatocitáit, és ez azért volt, mert képesek voltak kötődni az ApoE-hez. Aztán vannak más részecskék is, amelyeket felfedeznek, például a kardot, és mások, amelyekhez, tudod, más szérumfehérjékre van szükségük, amelyek el tudják juttatni őket egy bizonyos szervhez. De tudod, a szérumfehérjék koncentrációja alacsonyabb is lehet. Tehát az a kérdés is érdekes, hogy megcélozhatod-e őket, ha megnézed, tudod, a gondolkodás testét, mint ahogy ezt már korábban is megtettük, ahol célzó ligandumokat helyeztünk el.

Ha egyszer ráhelyezünk egy célzó ligandumot egy részecskére, akkor az a probléma, hogy sok az opcionális lehetőség is, tehát a szérumfehérjék is kötődnek, és nehézségek adódtak a szállítás során. ez nem történne meg. Úgy gondolom, hogy ez még mindig értékes ötlet, és ahogy az olyan emberek, mint Dan Pierre azon dolgoznak, hogy célzó ligandumokat helyezzenek rá, és az újabb technológiák megjelenésével és ezeknek a részecskéknek a kifejlesztésének gyorsabb módjaival lehet, hogy ezeket is meg tudjuk célozni. nem volt könnyű kihívás. A legjobb az a részecske volt, amely éppen most vett fel egy szérumfehérjét, és a részecske természetéből adódóan eljut, de azt hiszem, a célzási képességet nem tudjuk alábecsülni, és ismét a terület működött, így ha beszélsz az emberekkel olyanok lesznek, mint, tudod, csináltuk már ezt, hihetetlen kihívások voltak. De úgy gondolom, ahogy korábban mondtam, amikor újabb technológiák jönnek a szűrésre és hasonlók, lehetséges, hogy ezeket is meg tudjuk majd célozni. Tehát mindkettőt megtehetjük, úgy gondolom, hogy szeretnünk kell valami jó tudományt csinálni, hogy megoldjuk ezeket a kihívásokat. Tehát, visszatérve a célzási kérdésedhez, lehet, hogy valami olyasmi lehet, amit a részecske felvesz a szérumban, és ami eddig nagyon sikeres volt. Vagy szerintem ez lehet a célzási megközelítés is, ezek kevésbé sikeresek, de fennáll annak a lehetősége, hogy egy idő után ők is elkezdenek dolgozni, ha ez megválaszolja…

[00:58:15]

Nima Tamaddoni, PhD

Oké, nagyon jó, nagyon jó. Oké, folytasd. 

[00:58:24]

Graham Taylor, PhD

Oké. Fantasztikus! Elnézést az ottani visszhangért. Lássuk tehát, ez Yamin Zhao kérdése, figyelembe véve a lipidcserét és a lipoproteinekkel és plazmával való kölcsönhatásokat, az injekció beadása előtti eredeti LNP-készítmény nem biztos, hogy ugyanaz a készítmény, amelyet a sejtek internalizálnak. Van-e mód annak mérésére vagy szabályozására, hogy az LNP szerkezet végül elérje a sejtet?

[00:58:51]

Dr. Gaurav Sahay

Szerintem ez egy nagyszerű kérdés. Azt hiszem, ez olyasvalami, amit mi, tudod, a laborom hosszú távú célja az, hogy megértsük az in vivo emberkereskedelmet, igaz? Ahogy az általam bemutatott lépések, ez is nehezebb volt, mert olyan alacsony a menekülés, hogy nem igazán lehet elképzelni semmit, ezekkel az újabb ACE-kkal, mint a galaktin, és ezt megteheti. A kihívás azonban az, hogy ezt hogyan kell megtenni in vivo, és ha egyszer elkezdi ezt gyorsabban csinálni in vivo, akkor elkezdheti megvizsgálni a szerkezetet, valamint az in vivo beállításokat. Tehát egyetértek Jemennel abban, hogy csere történik, és ha a dolgok belsővé válnak, belülről teljesen másképp alakulhatnak. Tehát például az MC3 alapú részecskék, in vitro rendben vannak, nem? És ismét itt van az in vitro és in vivo korreláció kérdése, ami a mi területünkön nagyon korlátozott, de ha azt mondjuk, hogy ha megnézzük az MC3-at in vitro, akkor jól működik, de in vivo egyszerűen fantasztikus, igaz? Tehát valami történik ott, ahol a részecske még erősebbé válik, mert szerkezete olyan, hogy kölcsönhatásba léphet az endoszomális vezikulákkal, tehát ez alapvetőbb kérdés. Szerintem mindenképpen meg kell találnunk a választ erre. Ezen a területen még nem tartunk, és ezt aktívan kutatni kell. 

[01:00:26]

Nima Tamaddoni, PhD

Menj tovább.

[01:00:27]

Graham Taylor, PhD

Szóval, igen, azt hiszem, ez egy olyan kérdésre vonatkozik, hogy a készítményfejlesztés és -tesztelés során a legjobb-e közvetlenül az egyéni teszteléshez menni, és ott kezdeni az in vivo tesztelést, és átmenni, tudod, in vitro munka vagy mindkettő és esetleg az alkalmazás alapján változik? Szóval, talán beszélhetnél egy kicsit arról, hogyan közelíted meg ezt, ha inkább az állatmodellek felé fordulsz, vagy esetleg megváltozik.

[01:00:57]

Dr. Gaurav Sahay

Szóval, azt hiszem, tudod, van az… in vitro és in vivo korreláció a terepen elég rossz, és így ha képes vagy közvetlenül in vivo menni, akkor szerintem ez a legjobb stratégia, mivel úgy gondolom, hogy sok alapvető tanulmány korlátozott, így jelenleg nem lehet azokat elvégezni. Módszereket kell kidolgoznunk ezek in vivo végrehajtására, miután elmondtuk, hogy néhány részecskék, amelyek, tudod, valahogy egyáltalán nem működtek, miután elkezdtük megérteni őket. Például, ha olyan részecskét ad hozzá, amely ApoE-függő, az nem transzfektálja a sejteket, és amint elkezdi az ApoE hozzáadását, az in vitro, hogy javítsa a korrelációt ezekkel a részecskékkel, növekedni kezdett. Szóval, úgy gondolom, hogy ha egyszer megvan az alapvető megértése, akkor ez a korreláció jobb lesz. De ha ez egy újabb terület, akkor alapvetően akkor van értelme közvetlenül in vivo. Néha ez nem lehetséges csak az erőforrások miatt, vagy akkor is, ha elsődleges sejttípusai vannak, ezek sokkal inkább reprezentálják az in vivo beállítást. De tudod, úgy gondolom, hogy ha van olyan módszer, mint a tesztelés, ami egyszerűbb, és ami miatt lelépsz az in vitro módszerről, akkor közvetlenül in vivo is eljárnék. De vannak bizonyos megfontolások, különösen, ha vannak elsődleges sejtek, elsődleges emberi sejtek, amelyeket használhat, akkor ennek van valami értelme. A nap végén ezt in vivo tesztelni kell, és sajnos elég rossz a korreláció. Tehát, ha kihagyhatna bizonyos lépéseket a közvetlen in vivo eléréshez, akkor szerintem ez elég jó, de ez is attól függ, hogy milyen típusú tanulmányokat próbál végezni. Hogy lehet, hogy korlátozott az erőforrások utánajárni.

[01:02:54]

Graham Taylor, PhD

Biztos! Oké, lássuk, van időnk még néhány kérdésre. Susan Kiati azt kérte, hogy lássuk, meglátjuk, ha csengenek. Tudna megjegyzést fűzni az FDA nanoanyagokra vonatkozó, 2017. decemberi útmutatástervezetéhez? Vannak-e konkrét kihívások ebből az útmutatóból?

[01:03:18]

Dr. Gaurav Sahay

Azt kell mondanom, hogy fogalmam sincs róla. Nem néztem meg az útmutatást, tudod, nem, tudod, meg kellene, alapvetően jó ötletnek tartom, különösen úgy gondolom, most az oltással kapcsolatban, azt hiszem, az egyik legfontosabb dolog az, hogy az FDA milyen gyorsan hagyja jóvá, ha ugyanaz az LNP, és hasonló az RNS-hez. Szóval ezeket a dolgokat nagyon érdekes tudni, és nagyon várom, de sajnos nem tudok a 2017-es útmutatásról.

[01:03:54]

Graham Taylor, PhD

Igen, azt hiszem, ez egy jó útmutatás 2017-ből, tehát technikailag a COVID előtt jött volna, de minden bizonnyal az ilyen típusú terápiák és vakcinák szem előtt tartásával készült, tudod, biológiai termékek, amelyek nanoanyagot tartalmaznak, ami maga is egyfajta. tág, de úgy is alkalmazható.

[01:04:14]

Nima Tamaddoni, PhD

Ezt a kérdést pedig pénteken sok előadónknak fel lehet tenni.

[01:04:20]

Graham Taylor, PhD

Ez igaz. Tehát igen, lehetőségünk lesz még egy kicsit többet beszélgetni egy újabb Q/A szekcióról, és más panelekről is, amelyek inkább iparági célt szolgálnak. Szóval kezdjük, kezdjük. Szóval, ez egy olyan kérdés, amivel beszélhetsz. Susan egy másik kérdése a bőrbe juttatással kapcsolatban, a szilárd nanorészecskék és a lágy nanorészecskék között, melyik a jobb szállítás? Szóval, nézd, mit tudunk ott?

[01:04:50]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, azt hiszem, tudod, a bőr megint egy másik akadály, és azt hiszem, az emberek, tudod, megpróbálhatják használni, mint valami mikrotűt, hogy tanulmányozzák őket. Szóval, tudod, dolgoztunk a részecskékkel, például a hidrogélbe helyezett részecskékkel, csak nem sültek ki olyan jól. Szóval, azt hiszem, ez egy olyan dolog, ahol a szilárd részecske sokkal jobb lehet. Attól függ, hogy milyen készítményt készítesz, hidrogélben, vagy tükörben vagy tapaszban. Tehát ezek alapvetően megfogalmazási megfontolások, amelyeket iteratívan ellenőrizni lehet. Tegnap hallgattam valakit, aki a bőrbe juttatáshoz használt szilárd részecskékről beszélt. Szóval, azt hiszem, megint nincs személyes tapasztalatom ezzel kapcsolatban, de ez inkább egy iteratív formulázási dolgok, amelyekre oda lehet figyelni, és az adagolási forma kialakítására lehet figyelni, hogy valóban rájöjjön, hogy az egyik dolog működik-e vagy a másik. , akár lipidről van szó, mint mi, néha alábecsüljük a polimerek erejét, mert tudod, természetesen én lipideken dolgozom, de előtte, mint a doktori fokozatomat, polimer alapú rendszeren dolgoztam, szóval szerintem ezeknek is nagy érdemük van, szóval ha utánanézel a helyi kézbesítésnek, akkor lehet, hogy van mód rájuk is. Tehát ez egy újabb anyagok, de egyben adagolási forma is, és ez egy iteratív folyamat, amelyen szerintem, tudod, az emberek dolgoznak, és remélhetőleg a jövőben többet fogunk tudni róla.

[01:06:37]

Graham Taylor, PhD

Fantasztikus! Lássuk csak, felteszünk még egy kérdést, majd Hardik másik paneltagot, szerintem van egy megosztanivalója. Egy kérdés, van-e megjegyzés az LNP és a módosított vagy módosítatlan mRNS közötti szerkezeti kapcsolati különbségekre?

[01:06:57]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, rendben. Tehát ez megint olyan papírokon alapul, amelyek jöttek, és nem, ismered a személyes tapasztalatokat, de alapvetően úgy gondolom, hogy a módosítások alapvetőek, ha kiváltasz néhányat, különböző válaszokat ismersz. De azt hiszem, az emberek még mindig dolgoznak egy nagyon tiszta formális, tudod, az RNS-készítmények elkészítésén is, és ez valójában nagyon jó lehet, hogy az IV beadása után módosított és módosítatlan papírok nem mutattak nagy különbséget, de talán mint amit az oltásoknál mutat. És tudod, ezek a klinikai vizsgálatok, amelyekben a módosítások valóban segítettek valamiféle jó immunválaszt kiváltani utána. Tehát úgy gondolom, hogy ez még mindig folyamatban van, annak ellenére, hogy a klinikai vizsgálatok azt mutatták, hogy a módosított változatok jobbak, kivéve más szállításhoz vagy más célpont szállításhoz és ezen mRNS tisztaságához. Tudod, több is kisülhet belőlük, szóval nincs határozott válasz, de úgy gondolom, hogy ez még folyamatban van.

[01:08:14]

Graham Taylor, PhD

Oké. Nos, lássuk. Az egyik kérdés, Muhammad Islam felteszi, hogy van egy másik fontos kérdése az mRNS-LNP stabilizálásával kapcsolatban, és meg tudjuk-e mérni a víztartalmat az LNP-n belül, vagy van-e olyan elemzés, amelyet végzett vagy javasolhat, csökkenthetjük vagy megszüntethetjük az LNP-n belüli víztartalmat?

[01:08:40]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, nem tudom, én, tudod, ez egy nagyszerű kérdés. Mint mondtam, az LNP szerkezete még mindig vita tárgya, tudod, vannak olyan papírok az Esta Zeneca-tól, ahol az mRNS-ek és hasonlók, tudod, alapvetően vízben, majd az ionizálhatóság valamilyen csöveket képez. Tehát nem tudom, hogy az összes mRNS víztartalom eltávolítása jó ötlet-e vagy sem, mert ismét olyan, mintha egy olyan alagútban lenne szolubilizálva, amelyben víz van, és RNS van benne. Szóval tudod, mennyi ez elengedhetetlen a hatékony szállításhoz, nem tudom. Ismét a belső struktúra az, amit még mindig kitalálunk, igaz? Mint azt ma már tudjuk, hogy a peg lipid a felszínen van, ezt követi talán a DSPC, majd ott van az ionizáló vér és a koleszterin. Tehát, hogy hol vannak a vízzsebek, és döntő fontosságúak-e, hogy jó ötlet-e az eltávolításuk vagy sem, az nem világos, de az emberek számítástechnikai tanulmányokhoz hasonlóan dolgoznak, és ezt is megoldják. Tehát ismét azt gondolom, hogy ezek mind nagyszerű kérdések, és nem vagyok biztos abban, hogy hogyan lehet… ez egy jó kérdés, meg kell vizsgálnom, például hogyan lehet megnézni a víztartalmat a belső térben. LNP ezen a ponton.

[01:10:13]

Graham Taylor, PhD

És akkor azt gondolom 

[01:10:15]

Nima Tamaddoni, PhD

Ó, Hardik élőben érkezik, szóval most megkérdezheted tőle.

[01:10:18]

Graham Taylor, PhD

Oké, igen, Hardik.

[01:10:20]

Nima Tamaddoni, PhD

Igen, Hardik az egyik paneltagunk, aki a Montana Egyetemről csatlakozott; van néhány kérdése, köszönöm.

[01:10:26]

Dr. Gaurav Sahay

Szia Hardik!

[01:10:27]

Dr. Hardik  

Köszönöm. Ó, köszönöm Nima Tamaddoni, PhD. A kérdésem a hőmérséklet-stabil mRNS LNP fejlesztésre vonatkozik, szerinted mi lesz az idővonal, vagy bármilyen ígéretesnek tűnő papír, amivel találkoztál?

[01:10:44]

Dr. Gaurav Sahay

Igen, azt hiszem, tudod, Yuzu Dong papírjait használták, olyanok, mint a szacharóz, és olyan dolgok, amelyek már LNP-készítményekben vannak. Úgy gondolom, hogy ez ismét egy aktív kutatási terület, különösen, mivel ez olyan nagy figyelmet kapott, hogy egészen biztos vagyok benne, tudod, a BioNTech, a Pfizer, a Moderna, formulázó tudósaik éjjel-nappal dolgoznak, és talán már rájöttek. ? Mint amikor ez elkezdődött, és az emberek azt mondogatták, hogy ó, ez mínusz 80, azt mondtam, olyan nagy érdeklődés mellett, és ez egy gyógyszerészeti probléma, akkor elkezdi látni a megoldást, aztán az lett, hé, ez -20, és akkoriban pl. ezeket az LNP-ket nem jól jellemezték a Pfizer számára, mert azt hiszem, az Acutastól és a BioNTech-től kapták, hogy valóban tudják, mik a stabilitási jellemzők. Tehát a kockázatok kiküszöbölése érdekében a mínusz -80 jó ötlet volt, de úgy gondolom, hogy amint több stabilitási adatot kapnak, úgy gondolom, hogy elérhetik a mínusz 20-at. De a szobahőmérséklet stabilizálása szerintem nagyobb hatással lenne. . Szerintem nagyon gyorsan el tudják érni a 4 fokot néhány ilyen változtatással, hogy különböző adalékokat adnak oda. De úgy gondolom, hogy az oltóanyagok szobahőmérsékletűek legyenek, ami a gates alapítványának régóta fennálló célja. Ismerem Bob Langerst és Anna Jankot, mint aki más fehérje típusú oltóanyagok előállításán dolgozik, amelyek szobahőmérsékleten stabilak.

Szóval szerintem ez, az idővonal szerintem sokkal gyorsabb a világjárvány miatt, nehéz megjósolni a tudományt. Tudod, nem akarok tudós lenni vagy elég alázatos lenni ahhoz, hogy ne mondjam, hogy ez mostanra megtörténik, mert a tudomány adhat neked, tudod, egy bizonyos időpontban alázatossá tehet, de szerintem Mivel olyan sokan dolgoznak rajta, csak különösen négy fokig, azt hiszem, hogy elég gyorsan elérik, és azt hiszem, sokan dolgoznak rajta, de azt hiszem, azt is meg kell értenünk, hogy miért probléma a stabilitás, nem? Ez a lipid nanorészecske, igaz? Például az LNP elég instabil? Ez az mRNS? Ez a környezettel való interakció? Tehát nagyon sok fizikai kémia van az elmémben, amit jól meg kell érteni ahhoz, hogy megoldjuk ezt a problémát, és úgy gondolom, hogy ez sokkal egyszerűbb probléma, mint az endoszómától való megszökés, amelynek annyi biológiai akadálya van. Szóval, ez a probléma, tudod, a fő alapvető gyógyszerészeti probléma, mint ahogy a gyógyszeripar ezt a megélhetésért teszi. Szóval, egészen biztos vagyok benne, hogy kitalálnak módszereket, szerintem az egyik módja a liofilizálás, nem? Ezeknek a részecskéknek a liofilizálásához hasonlóan ezt is megpróbálhatják.

Tehát por formában, majd újra, tudod, és akkor ezt is beletesszük a véleményünkbe. Tehát vannak más módszerek is a dolgok stabilizálására, például a liofilizálás, és az ehhez hasonló dolgok, amelyek szintén sokkal gyorsabbá tehetik. Szóval szerintem gyorsabb lesz, mint gondolnánk. De úgy gondolom, hogy ilyen szobahőmérsékletűre hozzuk őket, ami igazán nagy hatással lesz. Tehát, ha tudna jönni olyan készítményekkel, amelyek szobahőmérsékleten stabilak, különösen az egész világon, ahol akkor nem kell fenntartani az ellátási láncot, az csak átalakító lenne, és akkor a terápiák számára is. Bármi is történik az oltóanyagokkal, és javítja a hatásukat, vagy stabilabbá teszi őket, a jövőben is segíti a terápiákat.

[01:14:40]

Dr. Hardik  

Köszönöm, Dr. Sahay.

[01:14:43]

Graham Taylor, PhD

Igen, köszönöm szépen. Tehát van jó néhány kérdés, és most kiválogatunk néhány kérdést, amelyek megválaszolására Dr. Sahay lehet a legalkalmasabb, és sok más jó kérdés is van. Ha olyan kérdése van, amelyet nem tesznek fel vagy nem kapnak választ, tudjátok, hogy megvan, és reméljük, hogy utána tudunk járni, és megválaszolhatjuk valamelyik későbbi kérdés/válasz megbeszélésen a minta-előkészítés néhány technikai vonatkozásáról. vagy mi a legjobb módja az efféle minták elkészítésének. Az egyik, lássuk, szóval a ponton, Jemen Zhao említette az LNP liofilizált készítményét, amelyet Ön is érintett, tehát ez egy másik lehetséges út a stabilitás elősegítésére az oltások vagy más gyógyszerek stabilizálására. Mosain Ramazan Poornak van egy jó kérdése, hogy a molekuláris mechanizmus az LNP endoszómális membrán fúziójában és génszobájában? Tehát mit tudunk az LNP endoszomális fúziójának vagy felszabadulásának molekuláris mechanizmusairól, és tud-e valamit azokról a helyi lipidfázisokról, amelyek elősegítik a gén felszabadulását, tehát…

[01:15:50]

Dr. Gaurav Sahay

Ismét egy remek kérdés! Azt hiszem, tudod, kapunk néhány nyomot arról, hogyan történik ez, de tudod, azt hiszem, sokkal nehezebb, főleg ami in vivo történik. De azt hiszem, tudod, volt egy felülvizsgálatunk, ahol azt gondoltuk, hogy különböző folyamatok léteznek, igaz? Mint a protonszivacs ott volt, mint a fúzió, de azt hiszem, egyre világosabb, hogy valamiféle endoszomális fúzió történik. Még a közelmúltban is vannak olyan cikkek, ahol az az elképzelés, hogy van egy fordított hexagonális fázis, amely akkor következik be, amikor az ionizálható lipid kölcsönhatásba lép a negatív töltésű endoszómális membránnal, és ez egy olyan elrendezés fordított hexagonális fázisát okozza, amely jobb meneküléshez vezet. Tehát, ha a lamelláris fázisból egy fordított hatszögletű fázisba tud eljutni, ha a részecske egy endoszómális membránra kerül a luminális oldalon, akkor az elrendezés segíti a menekülési folyamatot, miután azt mondtam, hogy azt hiszem, tudod, ez minden Jó hipotézisek, hogy vannak és vannak már bizonyos biofizikai érdemek, és az emberek tanulmányozták, mint például Peter Cullis, Dan Siegert nemrégiben volt egy tanulmánya, ahol a hipotézis alapján sok különböző lipidet készített, amelyek segíthetnek a jobb géntranszfekcióban. , esetleg endoszómális szökéssel. Szóval, azt hiszem, ez kevesebb módszer, kezdetben az emberek azt hitték, hogy egy endoszómális membrán visszafúziója, ami lehet valami. Szóval szerintem van fúzió, ami biztos. A fordított hatszögletű fázis lehet az egyik lehetséges módja, de mik azok a molekuláris szabályozók, amelyek ezt csinálják, igaz? Ennyi galektin8 van, amely egy endoszómális membránhoz kötődik.

Szóval, úgy gondolom, hogy olyan dolgokkal, mint az ELNP-k, most meg tudjuk határozni, hogy mik azok a molekuláris szabályozók, amelyek segítenek a fúziós folyamatban, ez csak a fordított hexagonális fázis, vagy, tudod, az ionizálható lipideket tartom hatóanyagnak, mert tudod, egyszer… szóval például a kapszulázáshoz a részecske csak kapszulázza, csak egy segédanyag, de ha egyszer kölcsönhatásba lép egy endoszómális membránnal, majd a fúzió révén megváltoztatja a membrán permeabilitását, és olyan dolgokat okoz, mint a galektin. Egyfajta aktív összetevővé válik az elmémben, amely a biológiai membránhoz kapcsolódik, és ismét visszatérve a kérdésedre, a többi szabályozóra, ezért vannak más szabályozók is a történetben, a galactin8 az egyik, amely segíthet megértenünk, hogyan transzport történik, van-e olyan, mint egy molekuláris transzporter, amely aktívvá válik és segíti ezt a fúziós folyamatot.

Szóval szerintem itt is sok mindent lehet tudni, de visszatérve a kérdésedre, hogy mi a részecske jellemzés, szerintem ez egy fúzió és egy fordított hatszögletű fázis, mi a biológiai közeg, mi változik ott, Úgy gondolom, hogy ha ezt elkezdjük kitalálni, akkor jobban megérthetjük, hogyan történik ez biológiai szempontból, és hogyan megy végbe a fúzió, mivel sok ilyen vírusnak különböző peptidjei vannak, amelyek kölcsönhatásba lépnek a biológiai membránnal. bizonyos módon, és az a hipotézisem, hogy az LNP-k is hasonló tulajdonságokkal rendelkezhetnek, és ez is jobb fúzióhoz vezethet. Megint elhúzódó válasz, de én már régóta endocitózisos srác vagyok. Szóval, ha endocitózissal kapcsolatos kérdést teszel fel, kapj egy hosszú ívű választ, ha pedig szabályozási kérdéseket teszel fel, ott leszek.

[01:19:46]

Graham Taylor, PhD

Igen, távol maradunk az FDA útmutatásától. Úgy gondolom, hogy ezek közül a kiváló kérdések közül jó néhányat megválaszoltunk. Köszönöm, jó öntést, Dr. Sahay, nem tudjuk elégszer köszönni, nagyon hálásak vagyunk, hogy időt szakított arra, hogy megosszon velünk, és így…

[01:20:08]

Nima Tamaddoni, PhD

Igen, valóban alázatosak vagyunk. Nagyon köszönöm Dr. Sahay-nek az idejét, és biztos vagyok benne, hogy 400 résztvevő élvezte a beszélgetést, és sok jó kérdést tettek fel. Elmegyünk egy közösségi ülésre, mindenki számára nyitva lesz, és ez egyfajta szünet alapvetően, egy órakor fogunk visszajönni Daryush Muhammadyanival a Johnson & Johnsontól, ő dolgozott. Korábban a Modernában, most pedig a Johnson & Johnsonnál dolgozik, kulcsszerepet játszott ezen vakcinák és terápiák, az RNS, LNP számítástechnikai megközelítésében is. Szóval, köszönjük minden résztvevőnek, nagyon hálásak vagyunk, hogy mindannyian jelen lehettek, és ez egy olyan platform, oktatási platform kezdete, amely reméljük, hogy mindannyian ebben a közösségben marad. Szóval köszönöm.

[01:21:14]

Dr. Gaurav Sahay

Köszönöm, ez volt az örömöm. Nagyon szépen köszönöm. Viszlát.

Kapcsolatfelvétel