Dr. Arote Rohitas

Szöuli Nemzeti Egyetem

Dr. Rohidas professzor Ph.D. 2009-ben a biotechnológiából Brain Korea 21 ösztöndíjasként (2005–2009) a Szöuli Nemzeti Egyetemen, Koreai Köztársaságban. Ezt követően a dél-koreai Szöuli Nemzeti Egyetem Mezőgazdasági és Élettudományi Főiskola Mezőgazdasági és Élettudományi Intézetében dolgozott posztdoktori tudományos munkatársként. 2010 decemberétől a Szöuli Nemzeti Egyetem Molekuláris Genetikai Tanszékének Fogorvostudományi Karára költözött. Arote professzor a bioanyagokat, a nanobiotechnológiát, a génterápiás nanomedicinát, a rák, a neurodegeneratív betegségek és a gyulladásos bélbetegségek gyógyszerbejuttatási alkalmazását vizsgálta. Jelenleg Prof. Arote a Molekuláris Genetikai Tanszék docenseként dolgozik. A Szöuli Nemzeti Egyetem Fogorvostudományi Karának Fogászati ​​Kutatóintézete és kutatócsoportja különféle nanomedicinális kutatási projekteket folytat, hogy fejlett nanoanyagokat fejlesszenek ki génterápiás alkalmazásokhoz és nanorészecskék alapú gyógyszerszállító rendszereket (DDS) rák kezelésére, neurodegeneratív betegségekre és nanorészecskék felhasználására. képalkotáshoz és teranosztikához.

4. augusztus 2021. Előadás a lipid nanorészecskék és egyéb nem vírusos nanohordozók globális konferenciáján

Többfunkciós nanoanyagok fejlesztése génterápiás alkalmazásokhoz

Beszélgetés átirata:


T&T Scientific Dr. Arote: Többfunkciós nanoanyagok fejlesztése génterápiás alkalmazásokhoz

[00: 12]

Dr. Rohidas professzor

Köszönöm. Szóval, köszönöm, hogy meghívott a konferencia T&T tudományos fórumára. Ma bemutatom az összes kutatómunkánkat, amit egy évtized alatt végeztünk. Tehát jellemzően bioanyagok fejlesztéséről van szó, kifejezetten génterápiás alkalmazásokhoz. Szóval, megosztom a képernyőt, egy perc.

[00: 41]

Nima Tamaddoni, Ph.D.

Igen. Képesnek kell lennie.

[00: 50]

Dr. Rohidas professzor

Igen, ez az. Nos, azt írja, remélem mindenki látja a csúszdát. Tehát kifejezetten ezeken a különféle típusú bioanyagokon dolgozunk, a génterápiás alkalmazások nanoanyagán. Tehát ez egy DNS szállítás, RNS, sejt RNS, és még az összes fehérje is. Tehát a részletekre menve, hiszen mindannyian ismerjük a génbejuttatás történetét, például nyilvánvalóan egy generáció esetében, például megvannak ezek a hagyományos gyógyszerbejuttató rendszerek, különösebb alkalmazások nélkül, de aztán eljutunk a konkrét alkalmazásokhoz és szabályozzuk a A hatóanyagok gyógyszermátrixból való felszabadulása, van egy generációs másodikunk, amely egy célzott vagy kontrollált gyógyszerbejuttatás, és itt tudjuk szabályozni a magas értékű, alacsony PK-értékkel rendelkező gyógyszerek reléjeit, valamint a többit. Tulajdonképpen könnyen kiürülhetünk a szervezetből, és az ismételt beadás elkerülése érdekében a harmadik generáció nyilvánvalóan génszállító rendszerek, ahol felhasználhatjuk mindezt a nukleinsavat, olyan terápiás szereket, mint a DNS, RNS, SHRNA, SIRNA, sőt még a mikro RNS is. még most is jönnek, a legújabb technológia, ami egy élesebb genetikai, élesebb Cas9. Tehát, ahogy mindannyian ismerjük ezt a génterápiát, ez nem más, mint az emberi betegségek kezelésére szolgáló különböző típusú megközelítések gyűjteménye. Tehát a génjeinken belül a fehérjetermelés szintézisére és szabályozására vonatkozó utasításaink, amelyek feladata az egyes sejtek homeosztázisának fenntartása? Tehát a különböző elemek által megváltoztatott gének sorrendjét, amely az emberi lény evolúcióját eredményezi

Másrészről néhány változás diszfunkcionális fehérjék termelődését okozza, és ennek eredményeként néha a sejt megbetegszik vagy rendellenes állapotba kerül, néha pedig elhal. Tehát, ha egy emberi utód önálló gyakorlatba kezd, a szüleitől kapott genetikai terv sok szempontból meghatározza az útját, életútját, és azt, hogy milyen betegség érinti. Tehát ezek mind génterápiás alkalmazások. Tehát ki kell javítanunk, hogy melyik rossz gén volt jelen a szervezetben, amely az adott betegséget okozza. Tehát, mint tudjuk, hogy ennek a génterápiának különféle alkalmazásai vannak. Így az utóbbi időben számos más gyakori betegség genetikai összetevőit is megállapították, mint például a rák, a szívbetegség és a cukorbetegség. Tehát sok ilyen rendellenesség környezeti stimulációt igényel, hogy elindítsa őket, de genetikai hajlam nélkül a betegség soha nem fejlődhet ki. Tehát ezek az öröklött fajták, valamint az egyenletek a génterápia fő célpontjai.

Tehát, mint mindannyian tudjuk, valójában nem fogom részletesebben megismételni, de akkor, mint egy alapvető, mint a génterápia ezen mechanizmusa, mivel a DNS-ek és a nukleinsavak ionos természetűek, ezért szükségünk van a krónikus polimerekre, amelyek ionosan megkötik őket. egy komplexben, majd ez a bizonyos poliplex, amit DNS-polimer komplexnek vagy DNS-hordozó komplexnek nevezünk, a sejtfelszínre kerül, és ezektől az időktől, valamint az általunk nevezett sebességkorlátozó állapottól függően felszívódik a sejtfelszínen és áthalad a sejtfelszínen. plazmamembránon, és endocitózison megy keresztül. Tehát ez az endoszóma, korai endoszóma későn, majd valószínűleg ezen időn belül, ha a rakomány vagy a DNS polimer rakomány gyorsan kikerül az endoszómából, akkor elég jól bejutni a sejtmagba és ha nem jön ki az endoszómából még késői endoszóma is, végül a lizoszómához, majd a lebomláshoz vezet. Tehát az egész génterápiás alkalmazásunk és a különböző típusú bioanyagok és nanohordozók tervezése ezektől a konkrét lépésektől függ, hogyan mennek keresztül ezek a nanorészecskék ezen a konkrét ábrán? Tehát a génszállításnak négy fő eleme van, például egy célzott betegség, van egy terápiás génünk, van génhordozónk és végül egy génexpressziónk. Tehát e négy közül főként a génhordozó fejlesztésre koncentrálunk, ez az, aminek más típusai vannak. Tehát itt tudjuk, hogy vannak vírusvektorok és nem vírusvektorok. Tehát mostanáig sok tudós számolt be ezekről a retrovírusokról, hosszú vírusokról, adenovírusokról és minden különböző típusú vírusvektorról, amelyek nagyon sikeresek, különösen a gének célhelyre történő szállítása tekintetében. Ezen kívül számos hátrányuk van immunogenitásuk, toxicitásuk vagy karcinogenitásuk miatt, vagy önreplikációjuk vagy néha az inszerciós mutagenezis és így tovább. Tehát a szubsztitúciók fókuszba kerültek, mármint a nem vírusos vektorok, a valószínűségek, a sok lipid, nanorészecskék vagy néha csupasz DNS felé is eltolták a nézetüket, néha bizonyos esetekben jól működik, és a lipidek és polimerek kombinációja, ami a lipopoliplexek. Tehát a mai napig, ebben az egész korszakban, különböző típusú vírusokat használtak klinikai vizsgálatokban? És most az utóbbi időben, azt mondanám, hogy körülbelül öt vagy akár hetventíz év körül van, nagyon sok nem vírusos vektor is van klinikai vizsgálat alatt, és nagyon sikeresek, és ez a konferencia a lipidekről szól. nanorészecskék, tehát a világjárvány óta valószínűleg néhány év múlva láthatjuk a lipid nanorészecskék e hatalmas felhasználását a nukleinsav terápiában.

Tehát sikeres génbejuttatás esetén extracelluláris, intracelluláris gátjaink vannak. Tehát, ha egyszer legyőzzük ezeket az extracelluláris gátakat, mint ez a sejtmag támadásánál, amely keringési rendszer vagy szorosan tömött, az endothel sejtek néha megakadályozzák a diffúziót, és néha ezeket a retikuláris endothel rendszereket is, amelyek könnyen eltávolítják az anyagokat. Tehát, ha leküzdjük ezeket az akadályokat és ezeket a lépéseket, sokoldalú hordozót tervezünk, vagy természetesen nem. Legyőzhetjük és sikereket érhetünk el a gének céloldali szállításában, majd egyszer ez a gének a polimerekkel együtt, ahogy a poliplex bemegy a sejtbe, majd az endocitózis két-három különböző szakaszban. Különösen a savas PH-ban és még a késői endoszómákban is, kissé semleges a semleges felé. Tehát ezek a fajta technikai szempontok, ha egy adott módon el tudja érni, jó transzfekciót és jobb transzfekció-leadást érhetünk el, és jobb génexpressziót érhetünk el. Így, ahogy a génterápia ütemtervét láthatjuk 1990 óta szeptemberben, az első jelentés az agycsatornák sikeres kezeléséről és a betegek, akik ebben a súlyos kombinált immunhiányos szindrómában szenvednek, amelynek sajátos adrenocindiamin hiánya van.

Tehát azóta valójában nagyon sok sikertörténet létezik ennek a génterápiának, kivéve ezt a két fekete dobozt, amelyet 1999 júniusában és 2002 októberében láthatunk, ahol a klinikai vizsgálatok során a betegek meghaltak. Tehát szigorú korlátozások vonatkoztak a nemre, mert minden biztonságot garantáltak? Tehát minden olyan génterápiás anyag tekintetében, ahol fejleszteni szeretnénk, ezért konkrétan erre a három fő tényezőre kell gondolnunk, mint a specifitás, a hatékonyság és a biztonság. Mint tudjuk, ez kifejezetten nagyon fontos, hiszen nemcsak a kívánt sejtek természetét kellett megcélozni, és nem az egész sejtet, hogy belépjen a szervezetbe. A hatékonyság is egy nagyon egyedi paraméter, ahol kis adagot és nagy hatást érhetünk el, és végül a biztonság is olyan, mint minden anyag, minden vektornak és rendszernek, amit használunk, biokompatibilisnek kell lennie, nem toxikusnak, nem immunogénnek. és semmiféle daganatképződést nem okozhat. Mindezeket a tényezőket szem előtt tartva tehát úgy döntöttünk, hogy politechnikai kopolimerként egy hordozóanyagot használunk, mert tudjuk, hogy a polietilén középút valami nagyon aranyos egyedi és arany standard polimer a nem vírusos génterápia esetében, és ez sikerült is. széles körben alkalmazzák in vitro, in vivo is, valamint a beadás különböző típusaiban. De ennek a polietilénnek az a hátránya, hogy mérgező és biológiailag nem bomlik le, ezért nem tud könnyen kiürülni a szervezetből. Tehát, ha egyszer lerakódik, sok toxicitást okoz, és ez a nagy töltéssűrűsége miatt is. Tehát kölcsönhatásba lép a különböző típusú vérkomponensekkel és a nem célsejtekkel, és végül toxicitáshoz vezet.

Ezért úgy döntöttünk, hogy a polimereket használjuk. Mármint a polimerek, hiperelágazású polisztirol polimerek szintetizálását alacsony molekulatömegű polietilénnel. Úgy értem, mivel a nagy molekulatömegű polimerizációnak nagy toxicitása volt, ezért úgy döntöttünk, hogy kis molekulatömegű polifenolokat és különböző monomerek, például polikaprolakton vagy glicerin kopolimereit használjuk. Tehát hosszú könyvtárunk van a glicerin vagy cukor alapú polimerekből. Mindezek a polisztirol eszközök lesznek, ezek mind olyan dolgok, és észterkötésűek, ezért nagyon jól oldódnak vízben, jobb a DNS-kondenzációjuk, és a PI jelenléte miatt is nagy pufferkapacitásunk van, , tudod, végül az endoszomális menekülés. Első projektünk tehát a polikaprolakton alapú polimerek fejlesztése volt kis molekulatömegű poliuretán segítségével. Tehát itt, mint tudjuk, ez a polikaprolakton egy nem mérgező hidrofób és bioreguláris ág, tehát az USFD Afrod polimer. Tehát ennek a polikaprolaktonnak és a polietilén-aminnak a kopolimerje ennek a poliészter-aminnak a szintéziséhez vezet, amely biológiailag lebontható, nagy transzfekciós hatékonysággal és csökkentett magas toxicitással rendelkezik. Tehát úgy döntöttünk, hogy ezt a polikaprolakton-diakrilátot használjuk az 530 nanométeres molekulával… Elnézést. 530 Dalton, egyszerű mikro addíciós reakcióval szintetizáljuk ezt a poliészter-amint. Szintézisét NMR-rel és az összes spektroszkópiai technikával igazoljuk.

Azt találtuk, hogy ennek a polimernek nagyon jó a felezési ideje, ami majdnem 4.5-5 nap. Tehát ez a végső alkalmazások a vezérlőkibocsátás szállításához is. 200 nanométernél kisebb részecskemérettel rendelkezik, ami azt jelzi, hogy kiváló jelölt az intracelluláris bejuttatásra, valamint a zéta-potenciál és felületi töltési vezetékei, vagyis azt mutatja, hogy mérsékelt vagy határon belüli felületi töltése van annak érdekében, hogy felszívódik a hidrofób sejtfelszínen. Tehát azt találtuk, hogy ennek a szintetizált polimernek alacsony a toxicitása, és mindez 293 FGM és egy sejtvonal minden különböző koncentrációban, mármint bruttó függő módon. De végül, ha összehasonlítjuk a 25 kilohertzes pozitív polietilénbányával, láthatjuk, hogy nagyon mérgező, de ehhez a hordozóhoz képest alacsony toxicitást és sokkal jobb sejtszabadságot mutat. Majdnem 80 százalék körüli, és ez jó jel az állatkísérletekre is. Tehát ellenőriztük a luciferáz transzfekciós hatékonyságát a PGL3 segítségével, mivel ezek egy gént helyeztek el, és ebben a három különböző sejtvonalban azt találtuk, hogy ez a bizonyos polimer, amely különböző, három különböző polimerben van, különböző betáplálási arányokat használva. a magas tranzakciós hatékonysági előjel a lipopektaminhoz képest, valamint a PI 25, kilo Dalton P pozitív kontrollként. Egy másik jelentésrégióval, például egy GFP-vel számoltunk, azt találtuk, hogy az áramlási citométert is használva, például hasonló sorozatot mutat, és azt jelzi, hogy a hordozó felülmúlja a pozitív kontrollokat. Tehát a GFPN2 használatával járó beadási hibák alapján azt találtuk, hogy egy adott gén fluoreszcens expressziója az aeroszol beadása után még jobb, mint a PI 25 kilo Delta pozitív kontrollja. Tehát mindez azt jelzi, hogy a hidro jelenléte miatt ez az észterkötés a polimer nem zsugorodik semmilyen toxicitást, és ehhez hasonlóan nagy pufferkapacitása is van a PI gerinc jelenléte miatt.

Tehát a transzfekció súlyosságát is mutatja. Így később úgy döntöttünk, hogy a PG-t használjuk linkerként és konjugáljuk a folsavat, mert eddig nem volt konkrét célzásunk. Tehát itt úgy döntöttünk, hogy a folsavreceptorok megcélzásának sajátos módját választjuk. Ezért úgy döntöttünk, hogy a folsavat ehhez a polikaprolakton PI polimerhez konjugáljuk. Tehát a PG-t linkerként használták, mivel tudjuk, hogy a PG egy nem mérgező hidrofil és ad gyümölcs molekula, és növeli az oldhatóságot és a stabilitást is, ezért tulajdonképpen ez az oka annak, hogy ezt a darabot használjuk a linker. Tehát kezdetben egy kis nagy molekulájú PG-t használunk, amely egy bifunkcionális PG, és 5000 dalton molekula van. Tehát ez a folsav és a polikaprolakton PI-kopolimerhez való konjugálási módja. Tehát kezdetben a folsavat ezzel a GCCNHS kémiával aktiváltuk, és ezt az aktivált folsavat a bázikus PH-ban, piridint használva konjugáltunk ehhez a bifunkciós PG-hez, amely 5000 Dalton molekulatömegű. Tehát ezt a folát-PG-t, amely ezt az amidkötést fogja tartalmazni, hozzáadtuk ehhez a poliészter-aminhoz, a hordozónkhoz, amely EDCNHS katalizátor, és ez egy reprezentatív szerkezet, ahol láthatjuk a folsavrészt az adott végén. Tehát NMR-rel megerősítettük a szintézist, és azt találtuk, hogy a folsav közel 11.2 mól%-a konjugált ehhez a polimerhez, ami elegendő ahhoz, hogy megcélozza a folát receptorokat a sejtben.

Tehát itt megerősítjük a transzfekció hatékonyságát folsavpolimerekkel és anélkül, és azt találtuk, hogy nyilvánvalóan a folát konjugátum polimerek magas előnnyel rendelkeznek a nem folát polimerekhez képest, ami azt jelzi, hogy specifikus receptora van az endocitózis alkalmazására. Később olyan sejteket választottunk, amelyek bőségesen tartalmaznak folsavat, és amelyek kevésbé vannak folsavban, mint például az FJ2 és a KB. Tehát a KB egy szájkarcinóma sejtvonal, ahol a folsavreceptorok bőséges számban expresszálódnak. Tehát azt találtuk, hogy ez a bizonyos sejtvonal, amit láthatunk, nagyon-nagyon magas a transzfekciós diffúzió, és ez egy olyan alkalmazás, amely jelzi ezt a bizonyos, a hordozónk ezt a kölcsönös elfogó útvonalat követi. Később úgy döntöttünk, hogy ezeket a folsavreceptorokat külső folsavval blokkoljuk, majd a blokkolás után ismét transzfektáltuk a sejteket. Tehát itt a C ábrán láthatjuk, hogy folsavval és folsav nélkül a különbség. Tehát ez az egész ábra azt mutatja, hogy ez az adott rendszer követte a receptor anyagot ennek a helyén, konkrétan egy teljes útvonalon, és ez jó alkalmazás volt. Aztán később tovább mentünk egy másik hordozóval, ami egy glicerin alapú hordozó, és ahol glicerint használtunk, számold ki. Mint mindannyian tudjuk, a glicerin egy nem mérgező, hidrofil és biológiailag lebomló polimer, ráadásul az is, ráadásul ozmotikusan is aktív. Tehát ismét hasonló módon kis molekulatömegű polietilén-amint használunk, a poliészter-amint pedig mikroaddíciós reakcióval állítottuk elő. Ezt a spektroszkópiai technikák, például az NMR megerősítették, és ezt az összes olyan biofizikai tulajdonságot, mint a felezési idő és a nulla potenciál, valamint a részecskeméretet is megállapítottuk. Ezek a határon belül vannak, és bármennyivel is idősebbek a többi rendszerhez képest. Tehát a transzfekciónál azt találtuk, hogy a transzfekció esetén ezeknek a sejtvonalaknak van G2 hela és 293 is.

A polimer nagyon jó tendenciát mutat a dózisfüggő transzfekció tekintetében ebből az 5, 10, 20, 30 NP arányból kiindulva, valamint a GFP áramlási citométer segítségével. Tehát az ömlesztett félig aeroszol beadása után, a génexpressziós idő 48 órája után az egereket kimetszettük, és megállapítottuk, hogy ez a GDMPI polimer, amely magas transzfekciót mutat, és egyben a GFP zöld fluoreszcenciáját is jelenti a pozitívhoz képest. vezérlő, ami egy PI25k. Tehát ez megint egy nem specifikus módszer, akkor hasonló kategóriában egy másik hordozót szintetizáltunk, ami egy glicerin-akrilát alapú. Tehát mivel ezt a cukoralkoholt, mint a glicerin-di-metakrilát, glicerin-diakrilát, glicerin-tri-metakrilát, valamint a laktitol, mannit, xilit, mindezt a cukoralkohol-könyvtárat, valójában sikeresen szintetizáltuk a továbbiakban, majd jó eredményeket értünk el génszállítás feltételei. Aztán van még egy új hordozó, ez a laktol. Hasonló módon mi is nagyon jobban és sikeresebben szintetizáljuk, és a pozitív kontrollokhoz képest még nagy koncentrációban sem volt semmilyen toxicitás jele, és azt találtuk, hogy ennek jelenléte miatt a cukoralkoholra gondolok, erre a hordozóra. specifikusak ezekre a speciális glikoprotein receptorokra a májban.

Tehát, mivel ez egy cukoralkohol, és a májban a máj parenchima sejtjei alatt találhatók, túlzottan kifejezik ezt a problémát, mint a glikoprotein receptor. Tehát ez egy olyan mechanizmus, amelyet tulajdonképpen szem előtt tartottunk, majd úgy döntöttünk, hogy a májrákot célozzuk meg. Tehát először ezt a hordozót szintetizáltuk a laktitol felhasználásával, majd a laktorel-diakrilátot, majd ezt a laktorel-diakrilátot hozzáadtuk ehhez az ághoz, a PI-hoz Michael addíciós reakcióval. Tehát ez a bizonyos laktitol, vagy hasonlóan egy szabad hidroxilcsoporthoz, egy bizonyos rész felelős ezért a kaviárfelvételt serkentő részért, és a bázis, amely a központi, az extra kötés, ez felelős a hidrolízisért és ez egy lebomló rész. Tehát még egy hosszú polimer is van, ezen a ponton lebomlást érhetünk el, és az amin funkcionalitású rész felelős a DNS megkötéséért. Tehát így tervezték meg ezt a karriert, majd megerősítettük a toxicitást és a különböző sejtvonalakat, és azt találtuk, hogy még nagy koncentrációban is, például 30 NP-arány mellett a terület 80 százalékát, vagy 90 százalékát láthatjuk. a sejt életképességét, ami azt jelzi, hogy ezt a hordozót használhatjuk a sejttranszfekcióhoz az FG2 sejtekben. Így in vitro azt találtuk, hogy majdnem 13-szor magasabb reciprok, növekedés magasabb luciferáz transzfekciót figyeltünk meg. Így később arra gondoltunk, hogy vajon tényleg ezt polimerizálja-e, ez a polimer valóban ezt a recipromátor endosarézis utat követi. Tehát blokkoljuk ezeket a parenchimás sejteket, úgy értem, hogy a májban vannak G2-sejtek a külső galaktóz által, sőt 10, 20 és 40 millimol koncentrációban is. Itt látható a transzfekció csökkenő tendenciája. Tehát ez azt jelzi, hogy amint a külső galaktóz által blokkoljuk az extra glikopotens receptorokat. A külső anyagra gondolok, tehát nem nő a transzfekció. Tehát ez az útvonal azt jelzi, hogy ez a kompetíciós vizsgálat azt jelzi, hogy ez a cukoralkohol alapú polimer, amely egy polielektrol alapú polimer, receptor által létrehozott endocitózist mutatott a májrák kezelésére.

Nos, ennek a PI-gerincnek a jelenléte miatt protonszivacs hatásunk van, és mint mindannyian tudjuk, hogy ha egyszer blokkoljuk ezt a protonszivacsot ezzel a baktilomicinnel, akkor nem érhetünk el magas átviteli hatékonyságot. Tehát, ami a JP Bear-et illeti, 1997-ben mutattuk meg ezt a sajátos hatást. Tehát ez megint egy nagyon aktív, és láthatjuk, hogy a PI jelenléte miatt a pufferkapacitás nagyon alacsony és Ezt a PI pufferkapacitását könnyen tudjuk, megszámolják az endoszómát és a tartalom a citoszolban szabadul fel. Tehát ezzel a hordozóval, amikor ezt az in vitro sikert elértük, úgy döntöttünk, hogy konjugálunk egy molekuláris próbát, ami SI 5.5, majd az interferencia-eloszlás szerint eljuttatjuk ezekhez az egerekhez, mint egy normál bioeloszláshoz, és ezt a tulajdonságot csak azt akartuk ellenőrizni, hogy mely szerveket. a legtöbbet célozták meg. Megállapíthatjuk tehát, hogy valójában a máj az egyik legjobb szerv azon szervek közül, amelyeket ez a nanohordozó leginkább megcéloz. Tehát ez jelzi ennek a májnak a sajátosságait, ezért úgy döntöttünk, hogy tovább használjuk… iróniája, a projekt jelenleg is zajlik. Aztán a következő alapvetően erről a pályáról van. Tehát a következő hordozó a szorbitból származik, tehát Dr. Arif-ul-Islam már kiadta, aki a Harvardon volt, és azt hiszem, ma csatlakozik ehhez az üléshez.

Tehát már beszámolt erről a hordozóról, és ennek a speciális célnak köszönhetően nagy sikere van, itt láthatjuk ezt az endoszomális szökést, kisebb sejttoxicitást, valamint elkerüli az elektronok lebomlását a nagy pufferkapacitás és ennek a bizonyos résznek a célzása miatt. . Tehát ezek a paraméterek, valójában mire van szükségünk egy adott hordozóra egy sikeres génterápiás rendszer kialakításához. Tehát ezt az orbitális dimetilátot használták ebben a szintézis lépésben, majd itt egy lineáris polifenolumint használunk mikro addícióval, itt láthatjuk ezt a PSOAT transzporter alkatrésznek nevezett transzporter részt, amelyet ebből az orbitális átmérőből és a kis molekulatömegű polietilén. Aztán később a folsav konjugálásával tovább növeltük a specifitást. Tehát itt is újra, tudod, konjugáltuk a folsavhordozót, majd úgy döntöttünk, hogy megcélozzuk a folsavreceptorokat. Aztán az ellenfelet SIRNA-ként használtuk, ahol ez a megnyílás valójában megbénítja a mitokondriális diszfunkciót, és végül apoptózishoz vezet. Tehát itt a Western blot segítségével láthatjuk ennek az O-Parma Proteinnek a expresszióját, amely a többi polimerhez, más jelöltekhez és az itt látható daganatok számához képest bizonyos módon szabályozott, a daganatok számának csökkenése azt jelzi, hogy a sejtek… a daganatok apoptózison mennek keresztül, és összehasonlítják a kontrollal és a páros súrlórésszel. Tehát keverje össze az RNS-ét. Tehát ez egyfajta összehasonlító tanulmány, amely azt jelzi, hogy erről a bizonyos hordozóról már beszámoltak a DNS sikeres szállítására, de itt a SIRNA-hoz használtuk. Tehát a kutatásnak ez a része jelenleg kommunikáció alatt áll. Aztán tovább, az utolsó részt tulajdonképpen csak röviden összefoglalom. Tehát van a két új polimer, amit jelenleg használunk, és van szintetizátorunk és karakterünk is, van egy diuretin-dimetilát, egy másik egy triton-glikol-dimetilát. Tehát ennek a két hordozónak van egy egyedi sajátossága, hogy ők felelősek; anyagokat juttatnak az idegrendszerbe, különösen a mikroglia számára.

Tehát, ahogy mindannyian ismerjük ezt a mikroglia polarizációt, ha egyszer aktiváljuk ezt a mikrogliát, mert a mikrogliák az idegrendszer immunsejtjei. Tehát ennek a mikrogliának az aktiválása vagy polarizációja után a mikrobának két szakasza van, az M1 és az M2. Tehát az M1 felelős a gyulladást elősegítő tulajdonságokért, mint például a károsodás vagy a sejthalál és így tovább, és van egy másik szakasz, az M2, amely gyulladásgátló; olyan köztes tulajdonságokkal rendelkezik, mint a neurogenezis a sejtek helyreállításához vagy egyfajta új szintéziséhez. Tehát a mikroglia mindkét szakaszának megvannak a maga előnyei, és nagyon fontosak a mikroglia megcélzásához és polarizálásához. Tehát itt úgy döntöttünk, hogy ezt a két hordozót használjuk, amely egyfajta diuretin-dimetilát alapú polimer, a másik pedig egy trifillin-glikol-dimetilát. Tehát ezt a polimert hasonló módon, spektroszkópiailag jól szintetizáljuk, ellenőrizzük a toxicitást és nincs toxicitás jele, ellenőrizzük a fizikai kémiai paramétereket is, mint a részecskeméret és a zéta potenciál, és ezek nagyon egyediek és fantasztikusak erre a célra. intracelluláris szállítás.

Tehát itt, kezdetben ezt használtuk a transzfekció hatékonyságának ellenőrzésére, majd később folytattuk… később folytattuk az adott mikroglia-specifikus sejtvonalak alkalmazását. Mármint a mix glia sejtek mix, elsődleges sejttenyészetére gondolok. Tehát itt az intratekális beadásnál kezdetben a mix microglia primer sejtvonalak esetében ellenőriztük a transzfekciót, majd később úgy döntöttünk, hogy SRNS-t használunk a mikroglia célba juttatására ezzel az intratekális adagolással. Tehát kezdetben egy mikrogrammos és öt mikrogrammos koncentrációt használunk, és összehasonlítva azt használjuk, hogy melyik a legjobb. Tehát az öt mikrogrammot, az öt mikrogrammot és az egy mikrogrammot használva itt nem volt sok különbség. Tehát a mikroglia, az asztrociták és még a többi neuron is célponttá vált. Tehát itt az a célunk, hogy csak a mikrogliát célozzuk meg, az asztrocitát nem. Ezért úgy döntöttünk, hogy egy specifikus peptidet vagy antitesteket használunk, amelyek felelősek… amelyek nagy specifitásúak a mikrobákkal szemben. De előtte kaptunk egy, még akkor is, amikor a kezdeti nyers eredményeknél azt találtuk, hogy ez valami nagyon specifikusan a mikrogliát célozza meg, és az asztrocitáknak és még a neuronoknak sem túl sok tartalma, vagy nem sok százaléka van megcélozva. Tehát még alacsony koncentrációban is, mint egy mikrogramm, tehát ezentúl egy mikrogrammot használunk ehhez a sejtvizsgálathoz, majd ismét ellenőrizzük a transzfekciót az elsődleges kevert tiszta sejtekben, és azt találtuk, hogy még a 20 és 30 arány is volt. a magasabb bemeneti arány, akkor láthatja ezt a bizonyos polimert, amely egy uretán-dioxid-dimetilát. Ez a hordozó az átvitel nagyon jó jeleit mutatja, majdnem 20-30-szor nagyobb transzfekciót, mint a PI25 Dalton. Tehát ez jelzi a hordozó felsőbbrendűségét a többi hordozóval szemben, valamint a pozitív kontrollt, például egy lipofaktamin, amely a piacon van és kereskedelmi forgalomban kapható. Tehát ez azt jelzi, hogy a neuronális sejtet, mivel ezek ismét nagyon nehéz transzfektálni, összehasonlítva a többi sejtvonallal, mint például a BB sejtvonallal.

Mindkét polimer nagy transzfekciós hatékonyságot mutat minden lehetséges koncentrációban, még az 5, 10, 20 és 30 dózisban is. Ez azt jelzi, hogy ezek mind amolyan poliészterek könyvtára az alaphordozókban és a cukoralkohol alapú hordozókban, mint például a polikarpalaktin és a glicerin-dimetilát, a glicerin-trimetilát szorbit és még a xilit, a mannit és az eritrit is. Tehát ezek amolyan cukoralapú, cukoralkohol alapú hordozók, és hatalmas könyvtárunk van, és mindegyik sikeresen használható in vitro és innovatív is. Tehát konkrétan azt szeretném mondani, hogy ennek a poliészternek az egyedülálló képessége azt jelenti, hogy megcélozza az agyban lévő mikrogliát. Valójában az agy nagyon fontos platform ennek a neurodegeneratív betegségnek, és most dolgozunk ezen a neuropátiás fájdalomon, traumás agysérülésen, valamint ezen a gerincvelő-sérülésen. Szóval nagyon köszönöm a figyelmet. Tehát ezek a mi munkatársaink Koreából és a tengerentúlról. Köszönöm. Köszönöm a figyelmet.

[29: 49]

Riporter

Igen. Köszönöm szépen, nagyon informatív. Van néhány kérdésünk. Az első nagy beszéd az egyik dián azt mondta, aeroszol adagolás, miért az inhalációs út, és nem Ivy szubkután vagy intramuszkulárisan?

[30: 10]

Dr. Rohidas professzor

Nos, Ivy valószínűleg megint csak nagyon kis koncentrációra van szükség a bejelentkezéshez, Ivy esetén és nagy az esély a halálra vagy a balesetre is. De mivel aeroszol, miért aeroszol, mert tudjuk, hogy a tüdőnek nagy a felülete, tehát jobb, és a nagy felülete miatt van is, még könnyebb lehet a transzfekciós hatékonyság és az is, az a terület, amelyen a génexpresszióért dolgozni kell. Szóval, most már rájöttem, hogy ez valójában egy régebbi munka volt, de most már látom, hogy a COVID-járvány esetén, valószínűleg, ha bizonyos géneket vagy SRRNS-t fel tud használni a COVID leküzdésére, ez a konkrét eset, Az aeroszol adagolásnál az ilyen típusú hordozó valószínűleg nagy korú lesz. Úgy értem, valószínűleg sikerrel jár a hibaadminisztráció, amolyan spekuláció. 

[31: 11]

Nima Tamaddoni, PhD

Igen. Rendben, szóval van egy másik, több mint 300 gén szállítása van, elképzelem, hogy klinikailag használható jelöltek vannak egy adeno-asszociált vírusra, és kevés és a piac. Hány génbejuttatási lehetőség létezik a polimer lipid alapú hordozók számára a klinikán és a piacon? Köszönöm.

[31: 32]

Dr. Rohidas professzor

Nos, a közelmúltban, úgy értem, ebben az évtizedben nagyon sok ugrásszerű volt ezeknek a nem vírushordozóknak a száma, mióta a hatókörük nagyon sokféle van. Úgy értem, nagyon sok lehetőség van a különböző módokon történő módosításokra, például a betegségigénytől függően, tehát ez az egyik legjobb előny, de a vírusok esetében ez nem lehetséges. Az önreplikáció ismét komoly hátrányt és korlátot jelent a tudományos tudósok számára, amelyekre összpontosítani kell, ezért tulajdonképpen ez az oka annak, hogy az elmozdulás a nem vírushordozók felé irányult, nagyon sok van, amióta a kutyáktól kezdve. elektromos, kutyák az egyik első Nano gyógyszer. Mármint régen használt anyag. De azóta a génterápia esetében is rengeteg génterápiás hordozó van a klinikai vizsgálat körül, és kifejezetten modern, majd lipid is. Igen 

[32: 26]

Nima Tamaddoni, PhD

Igen. Tehát egy másik kérdés, hogy a készítmények székletbe történő bejuttatása fájdalmas. Alternatív szállítójárműveket fontolgat? 

[32: 40]

Dr. Rohidas professzor

Ez egy jó kérdés, mert a kezdeti ponton valójában azt gondoltuk, hogy célozzuk meg a mikrogliát, ezért ahelyett, hogy a szisztémás keringést használnánk a BBB átlépésével, úgy gondoltuk, először engedjük meg ezt, hogy a hordozónk valóban a mikrogliát célozza-e vagy sem, mert ebben az esetben kifejezetten a mikrogliát kell megcéloznunk, nem az asztrocitát, tehát ez a fő célunk. Szóval, kezdetben azt gondoltuk, hogy az intratekális, és teljesen fájdalmas. Az adott Nanos rendszer szállításához is készség kell. Tehát most valójában a rendszerszintű alkalmazást optimalizáljuk a rendszer körforgásának és a BBB átlépésével. Tehát itt tulajdonképpen a hordozó sajátos lipofil voltát is megtudjuk, mert a BBB átjutáshoz való felhasználásuk után át kell lépnie a vérsávos gáton. Szóval igen, készülőben van.

[33: 37]

Nima Tamaddoni, PhD

Nagyon jó! Rendben. Mi a véleménye arról, hogy a polimer nano-készítmények, mint például a PEI, amelyek már több évtizede kutatási területen vannak, miért nem naprakészek, nem befolyásolják, és miért nem állnak rendelkezésre klinikai használatra az IMP-k közelmúltbeli fejlődése miatt? 

[33: 58]

Dr. Rohidas professzor

Nos, a PI önmagában nyilvánvalóan nagyon mérgező. Nagyon jó a transzfekció, de mérgező is, mivel biológiailag nem lebontható, így a PI-t nem tudjuk úgy használni, ahogy van. De sok alkalmazás létezik PI kopolimerként, különböző más polimerek felhasználásával. Szóval ezeknek a kopolimereknek nagyon jó sikerük van még a Bob Langer laborban is, igazából régen, sőt, emlékeznem kell, azt hiszem, ez magában 2002-ben volt, publikáltak egy cikket a Jax-ban, és majdnem tízezer polimert mutatnak be. átlag, bocs, kétezer polimer, egy könyvtár a hard report screeningből, és ezek mind olyanok, mint nyilvánvalóan funkciókra gondolok, valamint a PI alapú polimerre is. Tehát sok munka folyik a PI alapú polimerek terén, de igen, mivel ez egy PI vagy egyedüli PI, nincs siker. Úgy értem, sajnálom, nincs esély egyfajta biztonságra, mert a PI esetében nagyon magas a toxicitás.

[34: 57]

Nima Tamaddoni, PhD

Dr. Rice, nagyon köszönöm az idejét, nagyon informatív volt, és ezt nagyra értékelem. Körülbelül van egy újabb Q/A munkamenetünk, ami körülbelül 15 percig tart a másik oldalon. Szeretnénk azonban megköszönni az idejét, és azt a képességét, hogy minden kérdésünkre válaszolt, nagyon hálásan köszönöm.

[35: 17]

Dr. Rohidas professzor

Köszönöm.

[35: 17]

Nima Tamaddoni, PhD

Nagyon szépen köszönöm.

[35: 18]

Dr. Rohidas professzor

Köszönöm szépen.

[35: 19]

Nima Tamaddoni, PhD

Nagyon szépen köszönöm. Hány óra van ott?

[35: 20]

Dr. Rohidas professzor

Nos, Indiában 12:20 van.

[35: 27]

Nima Tamaddoni, PhD

Nagyon szépen köszönöm. Köszönöm.

[35: 30]

Dr. Rohidas professzor

Köszönöm. Nagyon köszönöm, hogy ott lehettem. Nagyon köszönöm, alig várom, hogy kapcsolatba léphessünk veled. Köszönöm. Köszönöm.

[35: 37]

Nima Tamaddoni, PhD

Viszlát. 

[35: 08]

Interjú alany

Viszlát.

Kapcsolatfelvétel